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My my新蟲 (初入文壇)
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[交流]
【經(jīng)驗(yàn)分享】大鼠骨組織脫鈣切片經(jīng)驗(yàn)交流
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最近幫幾位同學(xué)做了批大鼠骨組織切片（股骨、膝關(guān)節(jié)），發(fā)現(xiàn)很多人在脫鈣這步容易出問(wèn)題，要么脫不凈切不動(dòng)，要么脫過(guò)頭導(dǎo)致組織結(jié)構(gòu)破壞、染色模糊。分享幾點(diǎn)我們的處理經(jīng)驗(yàn)，歡迎大家交流指正： 1. 脫鈣液怎么選？ · 酸性脫鈣液（如10%甲酸）：速度快，1-3天可完成，但對(duì)組織損傷較大，后續(xù)做免疫組化（IHC）可能影響抗原性，適合只做HE染色的樣本。 · EDTA脫鈣液：速度慢（2-4周），但能較好保留抗原和形態(tài)結(jié)構(gòu)，適合需要做Masson、天狼星紅或免疫組化的樣本。 我們?nèi)粘＝?jīng)驗(yàn)：如果做骨關(guān)節(jié)炎（OA）模型要染番紅O固綠，建議用EDTA慢脫，軟骨結(jié)構(gòu)會(huì)更完整。 2. 如何判斷脫鈣終點(diǎn)？ 脫鈣不夠切不動(dòng)，脫鈣過(guò)頭組織變軟發(fā)糟。我們常用的判斷方法： · 針刺法：用針輕刺骨組織，感覺像刺硬奶酪（稍有阻力但能刺入）即可終止。 · X光法（有條件的話）：拍片看骨組織影像是否消失，最準(zhǔn)確。 · 化學(xué)法：測(cè)脫鈣液鈣離子濃度，但平時(shí)用得少。 3. 切片不脫片的小技巧 骨組織含鈣，切片時(shí)容易掉片。我們?cè)囅聛?lái)最管用的是： · 多聚賴氨酸或防脫玻片（必備） · 烤片溫度：60℃烤2小時(shí)以上，過(guò)夜更保險(xiǎn) · 撈片水溫：42℃左右，水溫太高容易導(dǎo)致組織離散 發(fā)自小木蟲手機(jī)客戶端 |
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