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艾因斯新蟲 (小有名氣)
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用于快速血管內(nèi)止血的含鉭微粒的納米復(fù)合水凝膠
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介紹 抗凝治療(ACA)中的出血是一種嚴(yán)重的內(nèi)科急癥，具有高發(fā)病率和高死亡率僅在美國，就有超過2300萬人在ACA上出現(xiàn)心房纖維性顫動。每年有超過3000萬份coumadin的處方，新型口服抗凝劑的處方也在增加；僅香豆定的出血頻率估計為每年15-20%。使用機(jī)械瓣膜和心臟輔助裝置(CAD)的患者出血風(fēng)險更高。事實上，高達(dá)40%的冠心病患者會出現(xiàn)消化道出血(GIB)。這些患者胃腸道出血的最常見原因是炎癥、血管畸形或與創(chuàng)傷相關(guān)的病因。如果因另一種嚴(yán)重疾病住院期間發(fā)生出血，GIB死亡率會急劇增加至4倍，如果是復(fù)發(fā)性出血，死亡率會增加10倍。經(jīng)導(dǎo)管動脈栓塞已成為治療出血最安全、最有效的方法之一。 血管內(nèi)栓塞治療血管出血包括反復(fù)將線圈狀金屬線推入動脈，直到它們緊密堆積，以減緩血液流動和凝結(jié)。然而，彈簧圈栓塞與高再出血率、不可預(yù)測的經(jīng)濟(jì)性相關(guān)，最重要的是，它們依賴于患者形成血栓的能力。當(dāng)患者進(jìn)行抗凝或凝血治療時，這些問題會加劇。報道了一種用于凝膠栓塞材料(Ta-GEM)的新型生物工程化載鉭納米復(fù)合水凝膠，其可使用臨床導(dǎo)管快速遞送，用于即時止血，而不管凝血狀態(tài)如何。Ta-GEM制劑可通過大多數(shù)臨床可用的成像方式(包括超聲、計算機(jī)斷層掃描、磁共振成像和熒光透視)觀察到，沒有明顯的偽影。此外，Ta-GEM可回收，允許暫時血管閉塞，并可用于搶救線圈栓塞失敗的病例。發(fā)現(xiàn)在豬模型中Ta-GEM閉塞一級動脈如腎動脈和髂動脈是安全和持久的；到第28天時，動脈腔中75%的注射Ta-GEM被致密結(jié)締組織取代�？偟膩碚f，這項研究表明Ta-GEM比目前的技術(shù)有許多優(yōu)勢，在臨床實踐中有潛在的應(yīng)用。 實驗 開發(fā)Ta-GEM以提高可見性 臨床上，今天用于栓塞的金屬線圈在熒光鏡檢查中是可見的；然而，它們與CT成像、MRI和US一起產(chǎn)生顯著的偽影。由于人為因素，栓塞后無法評估介入治療的結(jié)果，這是當(dāng)今臨床實踐中的一個重大挫折。因此，我們測試了一種Ta-GEM配方，這種配方允許在所有成像模式下進(jìn)行材料和局部解剖可視化，包括CT、MRI、US和熒光透視，而沒有明顯的偽影。 為了提高GEM的可視性，我們將注意力集中在Ta微粒上，因為它已經(jīng)在各種醫(yī)療器械中臨床使用。Ta已被用作碘化劑的替代造影劑，因為它在生物學(xué)上是安全的，并通過尿液排泄。 使用SpeedMixer將平均尺寸為2 μm的Ta微米顆粒或尺寸< 25納米的Ta納米顆粒與GEM混合，形成Ta-GEM(例如，2–30% w/w的Ta-GEM)。CT體模研究(圖1A，B)表明，混合了20%鉭的寶石產(chǎn)生了令人滿意的可見度，沒有任何條紋偽影。熒光實驗表明，納米鉭不能均勻地分布在整個寶石中，導(dǎo)致可視性差；因此，隨后的實驗在GEM中使用了微米尺寸的Ta顆粒(圖1C，D)。 為了測試Ta-GEM在體內(nèi)的可視性，在超聲引導(dǎo)下使用21 G針頭經(jīng)皮進(jìn)入豬肝的肝靜脈；實時地，在Ta-GEM注射期間進(jìn)行US和熒光成像，顯示足夠的可見度(圖1E，F(xiàn)；白色箭頭表示兩幅圖像中的相同區(qū)域)。 用多種成像方式評估寶石可見度。a)顯示了八個注射器的CT軸位圖像，這些注射器在模擬人體胸部的模型中裝有0-30% Ta-GEM；b)與30% Ta-GEM或50%碘海醇-GEM (n = 4)相比，20% Ta-GEM(黃色虛線輪廓)顯示出相似的Hounsfield單位。c，D)裝載有含有10%碘海醇、20% Ta納米顆粒(納米Ta)或20% Ta微粒(微米Ta)的GEM的注射器的熒光圖像；d)熒光透視圖像上平均像素強度的定量顯示20%的微Ta產(chǎn)生足夠的強度(n = 4)；包括50%碘海醇作為對照，因為這是臨床上使用的濃度。e，F(xiàn))在使用20% Ta-GEM對豬進(jìn)行經(jīng)皮肝靜脈栓塞期間，同一區(qū)域(箭頭)的超聲和熒光圖像。g)含有0–30%鉭微粒(n = 3)的寶石剪切波彈性成像的圖解總結(jié)。h)填充有20% Ta-GEM的注射器的標(biāo)準(zhǔn)T1和T2 MRI的橫斷面視圖，顯示T1序列的衰減和T2序列的明亮信號。I)相對于MRI模型(箭頭)計算肌肉和肝臟的T1和T2信號強度。相對于在(I)中計算的信號，20% Ta GEM的T1和T2信號在圖中示出；這些表明Ta-GEM的信號強度大于肌肉或肝臟，表明它將通過MRI可見。l)20% Ta-GEM的掃描電子顯微鏡(白色箭頭，Ta微粒)。數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(**p < 0.01，***p < 0.001，***p < 0.0001)。 Ta-GEM的可注射性及剪切稀化性能分析 為了確定向GEM中添加Ta的效果，使用壓縮試驗(圖2A)檢查了GEM和Ta-GEM通過2.8 French (110 cm)和5 French (100 cm)臨床導(dǎo)管的可注射性。在這兩個系統(tǒng)中，Ta-GEM顯示出與GEM相當(dāng)?shù)目勺⑸湫裕砻魈砑覶a顆粒確實增加了注射力，但這些變化并未顯著影響可注射性(2.8法國導(dǎo)管，圖2B，C；5法國導(dǎo)管，圖2D，E)。接下來，我們研究了中斷交付的影響；再次觀察到對注射力沒有顯著影響(圖2F)。進(jìn)行間歇給藥并實時評估栓塞的能力是一個重要的特性；目前的技術(shù)不可能做到這一點。 除了可注射性之外，Ta微粒對GEM機(jī)械性能的影響通過流變學(xué)研究進(jìn)行分析。GEM和Ta-GEM的流動曲線顯示了相似的剪切變稀特性(圖2G)。為了評估GEM和Ta-GEM的爆炸強度，我們進(jìn)行了振幅振動試驗來測量它們的儲能模量G′和損耗模量G″。圖2H證明了GEM和Ta-GEM都是粘彈性的，它們的G′值約為G″的10倍。此外，與GEM相比，在Ta-GEM中沒有觀察到G′(在0.1%應(yīng)變下測量)的顯著變化(圖2I)，這表明Ta對GEM的機(jī)械性能影響最小。這些結(jié)果表明，GEM和Ta-GEM的栓塞強度相當(dāng)。 鉭寶石的物理機(jī)械特性。a)注射力測試示意圖。表中顯示了測試過程中使用的導(dǎo)管和參數(shù)(內(nèi)徑:導(dǎo)管內(nèi)徑)。b)在1 cc注射器中，通過110 cm、2.8F微導(dǎo)管以1mL min-1注射GEM和Ta-GEM的代表性注射力曲線。c)2.8F微導(dǎo)管系統(tǒng)中GEM和Ta-GEM的松脫力和注射力的總結(jié)(n = 5)。d)GEM和Ta-GEM的代表性注射力曲線，分別裝入3 cc注射器，通過100 cm、5F導(dǎo)管以2ml min-1注射。e)總結(jié)5F導(dǎo)管系統(tǒng)中GEM和Ta-GEM的松脫力和注射力(n = 5)。f)Ta-GEM通過5F導(dǎo)管以2ml min-1的速度間斷輸送(輸送10 s，然后停留5 s)的注射力曲線。g)比較GEM和Ta-GEM在37℃下的流動曲線，顯示剪切變稀特性。h)GEM和Ta-GEM在37℃下的振幅掃描。I)GEM和Ta-GEM在25和37℃下的儲能模量動力學(xué)總結(jié)(n = 3)。數(shù)據(jù)是(C)、(E)和(I)的平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。 評價Ta-GEM的血栓形成性、穩(wěn)定性和無菌性 Ta-GEM的增強的血栓形成性是實現(xiàn)血管閉塞的栓塞劑的有利特性。將與Ta-GEM混合的檸檬酸化人血的等分試樣中的血液凝固與用于患者的標(biāo)準(zhǔn)線圈進(jìn)行比較。當(dāng)與單獨的血液相比時，線圈、GEM和Ta- GEM都表現(xiàn)出促凝特性；然而，當(dāng)測量凝塊的質(zhì)量時，與單獨的GEM和血液相比，Ta-GEM在3分鐘時質(zhì)量開始顯著上升(圖3A，B)。這些結(jié)果表明Ta-GEM具有增強的凝塊形成特性，這可能進(jìn)一步穩(wěn)定血液-GEM界面的栓塞材料。 為了證實Ta-GEM的栓塞能力，進(jìn)行了體外栓塞實驗(圖3C–E)。GEM和Ta-GEM的位移壓力相似(35.8 3.9和33.2 2。G kPa，分別為；p = 0.5)，但明顯高于單獨線圈(9.9±1.5千帕，p < 0.0001)。更重要的是，當(dāng)Ta-GEM與線圈結(jié)合時，置換壓力可達(dá)234.5±21.4 kPa，幾乎是人體標(biāo)準(zhǔn)生理收縮壓的15倍。GEM與線圈組合的額外強度可能是由于Ta顆粒和線圈之間的摩擦增加。我們進(jìn)一步評估了Ta-GEM的穩(wěn)定性(圖3F，G)和無菌性(圖3H)。 Ta-GEM的血液血栓形成性和無菌性評價。a)與GEM、20% w/w Ta-GEM和市售纖維線圈混合的血液形成血栓的時間。b)與單獨的血液或單獨的GEM相比，Ta-GEM隨時間顯示出增強的血栓形成性的所形成凝塊的平均質(zhì)量。c)體外栓塞試驗中的阻力壓力曲線。d )( C)中數(shù)據(jù)的圖表總結(jié)顯示，與單獨線圈相比，Ta-GEM +線圈產(chǎn)生的峰值壓力最大(**p < 0.01，***p ≤ 0.001，***p < 0.0001，數(shù)據(jù)代表平均值SD，n = 3)。e)帶有和不帶有GEM(綠色)的血管模型內(nèi)的纖維線圈的照片。在D0、3、7、14、28和70，使用微型CT掃描儀對試管成像，并進(jìn)行圖像分析；顯示了管的冠狀視圖，白色亮點代表Ta。在多個水平的軸向視圖中計數(shù)Ta微粒的數(shù)量，并以(G)表示。使用單向ANOVA、Tukey的多重合作檢驗(ns:不顯著)進(jìn)行統(tǒng)計分析。h)將GEM和Ta-GEM混合在LB肉湯中并在37℃下培養(yǎng)7天的無菌試驗的圖解總結(jié)；接種了大腸桿菌的LB肉湯用作陽性對照。在600 nm處測量每個等分試樣的光密度。結(jié)果是平均值±SEM(* * p < 0.01，* * * p < 0.0001n = 4)。 Ta-GEM栓塞豬髂動脈的療效:非存活模型 基于可視化、機(jī)械測試和共凝固測試的結(jié)果，我們研究了Ta-GEM栓塞劑的療效豬的動脈系統(tǒng)。實驗旨在評估Ta-GEM與彈簧圈在極度抗凝狀態(tài)下一級動脈栓塞中的性能。使用臨床工具和成像設(shè)備，使用導(dǎo)線和導(dǎo)管的組合將導(dǎo)管尖端輸送至遠(yuǎn)端腹主動脈。數(shù)字減影血管造影術(shù)(DSA)顯示了主動脈分成成對的髂外動脈和髂內(nèi)動脈的特征性分裂。在靜脈注射20-30000單位肝素以達(dá)到ACT >300 s后，插入一條髂動脈；隨后，通過5 French Bernstein導(dǎo)管或2.8 French微導(dǎo)管使用Ta-GEM對約G–7cm的髂動脈進(jìn)行栓塞(圖4；圖4A–D和電影《S1與S2 》(支持信息)展示了Ta-GEM在體內(nèi)和尸檢時的實時釋放。 非靶向栓塞一直是栓塞術(shù)中關(guān)注的問題程序。作為一種安全機(jī)制，我們評估了Ta- GEM在意外或偶然的非靶栓塞事件中是否可以回收。5例患者使用Ta-GEM栓塞髂動脈；長達(dá)3小時后，使用半影抽吸導(dǎo)管系統(tǒng)(一種用于中風(fēng)血栓切除術(shù)的常見裝置)成功取出全部Ta-GEM。這些結(jié)果表明Ta-GEM是可以回收的；也第一次表明，臨時栓塞可能是一種可能性，例如，在血管創(chuàng)傷患者中，可以回收Ta-GEM以恢復(fù)正常血流。 抗凝豬髂動脈GEM栓塞的評價。a–C)。顯示了Ta- GEM注入髂動脈期間的系列數(shù)字減影血管造影術(shù)(DSA)圖像(有關(guān)實時視頻，請參見電影《S1 》,支持信息)。這些圖像顯示了從導(dǎo)管尖端(箭頭)退出時的即時堵塞，而沒有遠(yuǎn)端碎裂。d)尸檢顯示含有Ta-GEM的髂動脈(箭頭)。e) DSA顯示線圈未能實現(xiàn)閉塞(黑色箭頭；造影劑流過動脈內(nèi)的線圈塊)。對側(cè)髂動脈的白色箭頭顯示動脈被GEM完全閉塞。f)髂動脈中的造影劑注射顯示造影劑流過線圈塊(黑色箭頭)并超出線圈塊(白色箭頭)。在(f)中將Ta-GEM輸送至線圈塊后,( G)中的DSA圖像顯示完全閉塞(黑色箭頭),無突破性血流(白色箭頭)。h )( G)的冠狀微CT圖像顯示Ta-GEM(箭頭)均勻地鑄造了髂內(nèi)動脈，沒有偽影；相反，線圈塊(箭頭)產(chǎn)生明顯的條紋偽影，限制了對動脈和鄰近分支的評估。I–K)代表髂內(nèi)動脈的圖像，最初用Ta-GEM栓塞，后來用半影抽吸導(dǎo)管取回(黑色箭頭)。k)動脈栓塞后3小時取出GEM ≈后恢復(fù)血流。 Ta-GEM栓塞豬髂動脈的療效:長期存活模型 我們研究了使用Ta-GEM栓塞豬髂動脈的長期結(jié)果，同時接受每日抗凝抗血小板治療。栓塞術(shù)后存活28天，對動物進(jìn)行對比增強CT血管造影(CTA ),然后實施安樂死。所有1G的動物在每個時間點都表現(xiàn)出持續(xù)的栓塞，在CTA成像中沒有非靶栓塞的證據(jù) 通過計算機(jī)斷層掃描和組織學(xué)評估豬髂內(nèi)動脈閉塞。A)分別用H&E、VG彈性蛋白、Masson三色和髓過氧化物酶(MPO)對栓塞后0、7、14或28天的一組顯微CT圖像及其相應(yīng)的組織學(xué)上的髂內(nèi)動脈橫截面進(jìn)行染色。在第0天，用GEM(箭頭)均勻閉塞動脈。隨后，發(fā)生同心纖維炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致寶石的生物降解。b)顯示了在每個時間點分割每個血管內(nèi)的GEM之后，外植豬髂內(nèi)動脈的重建高分辨率微CT掃描的3D冠狀渲染(箭頭指向GEM，動脈內(nèi)為黑色；結(jié)締組織被描繪為灰色)。隨著時間的推移，GEM逐漸生物降解，纖維化增加(灰色)。c)主動脈至髂動脈的重建線性描繪，顯示左髂內(nèi)動脈內(nèi)的Ta-GEM(箭頭)和未閉的右髂內(nèi)動脈(箭頭)。d)來自(B)中的微CT分割數(shù)據(jù)集的Ta-GEM隨時間的定量顯示為揭示動脈內(nèi)Ta-GEM進(jìn)行性減少的圖。使用ANOVA和Tukey的事后分析，數(shù)據(jù)是n = 4，* p < 0.0001，** p = 0.007的平均SEM。 Ta-GEM栓塞豬腎動脈的療效:評估再通的急性和長期存活模型 髂動脈栓塞證明Ta-GEM是穩(wěn)定的，可持續(xù)閉塞超過28天，由于栓塞的髂動脈遠(yuǎn)端的CT圖像顯示有對比增強，所以不能肯定地排除栓塞的動脈段；這可能是由于跨盆腔側(cè)支血流繞過了栓塞段。為了評估隨著時間的推移Ta-GEM再通的可能性，對1G豬的主要腎動脈進(jìn)行栓塞。腎臟由終末器官動脈組成；主腎動脈的成功栓塞應(yīng)該導(dǎo)致腎的遠(yuǎn)端缺血和均勻萎縮。然而，Ta-GEM的任何再通都會導(dǎo)致血流的恢復(fù)和萎縮的減少或消失。此外，由于腎動脈是終末動脈，可使用Ta-GEM栓塞的最小血管也通過組織學(xué)確定和證實。 使用5號法國Cobra導(dǎo)管，對主要腎動脈進(jìn)行了導(dǎo)管插入術(shù)，并通過DSA成像進(jìn)行了確認(rèn)(圖6A)。隨后，注射2–3毫升Ta-GEM，導(dǎo)致動脈和閉塞的即時鑄造(圖GB)。使用Cobra導(dǎo)管從主動脈進(jìn)行的DSA成像始終顯示腎動脈完全閉塞。就在尸檢之前，使用臨床CT掃描儀進(jìn)行成像(圖GC–E)；這些結(jié)果表明，在28天的研究期間，栓塞的腎臟沒有血流，并出現(xiàn)進(jìn)行性萎縮。到第四周，栓塞的腎臟顯示出腎臟體積持續(xù)減少約4倍。而栓塞的腎動脈或任何遠(yuǎn)端動脈段沒有任何血流(圖GF–K)；這些數(shù)據(jù)，包括廣泛的CT圖像分析，表明不存在血管再通。 Ta-GEM栓塞豬腎動脈及其與明膠海綿的比較。a，B)使用Ta-GEM進(jìn)行腎動脈栓塞前后的熒光圖像；注射2–3毫升Ta-GEM后，完全沒有腎動脈血流流向腎臟(箭頭)。c)最大強度投影圖像顯示用Ta-GEM(箭頭)閉塞的左主腎動脈和節(jié)段性分支。d)軸位CT和E) 3D重建圖像顯示明顯萎縮的腎臟，腎動脈內(nèi)有Ta-GEM。f–I)分別在第0、1、2或4周使用Ta-GEM栓塞腎臟的代表性冠狀圖像。腎皮質(zhì)缺乏鉭寶石。j)顯示對側(cè)腎臟代償性肥大的尸體剖檢后4周栓塞腎臟的大體外觀的照片。k)腎動脈栓塞后總腎體積測量值的總結(jié)(***p < 0.001，***p < 0.0001，采用單向方差分析，每組n = 4)。使用明膠海綿栓塞腎動脈之前和之后的DSA圖像(黑色箭頭)。n)在栓塞后兩周，軸向CT圖像顯示盡管腎動脈栓塞成功，但栓塞的腎臟和動脈中的血流增強(黃色虛線輪廓)。隨著時間的推移，腎臟逐漸萎縮。數(shù)據(jù)以平均值SEM報告。 結(jié)論 在過去的幾十年里，經(jīng)導(dǎo)管栓塞術(shù)取得了巨大的發(fā)展。例如，大多數(shù)腦動脈瘤、非創(chuàng)傷性和一些創(chuàng)傷性出血以及消化道出血的治療已經(jīng)從開放式手術(shù)治療轉(zhuǎn)變?yōu)閺椈扇λㄈ委�。在這里，我們展示了一種用于GEM的新型組合物，由明膠、納米硅酸鹽和Ta微粒組成，具有剪切稀化特性，允許使用標(biāo)準(zhǔn)臨床導(dǎo)管輸送。Ta-GEM具有類似于線圈的血栓形成特性，可以滅菌，并且可以在超聲波、CT、MRI和X射線透視下可視化。它的置換壓力比收縮壓大很多倍，當(dāng)與線圈結(jié)合時，置換壓力超過1G00 mmHg。在豬體內(nèi)，Ta-GEM可在輸送至一級動脈的過程中實時顯示，使用臨床導(dǎo)管實現(xiàn)即時栓塞，其部署速度比線圈快40倍，且Ta-GEM保持在原位，不會碎裂或移位。Ta-GEM的動脈閉塞是持久的，沒有任何再通的跡象；Ta-GEM在豬體內(nèi)的生物降解很快，四周后僅剩余25%。在豬腎中Ta-GEM不會到達(dá)靜脈循環(huán)。此外，Ta-GEM是安全的，在標(biāo)準(zhǔn)實驗室測試、細(xì)胞因子陣列分析和CT成像中沒有毒性證據(jù)。 |
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