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手工搭了個簡易寡核苷酸合成裝置，求拍磚
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最近實驗室需要合成一些特殊修飾的探針，但現(xiàn)成的寡核苷酸合成服務(wù)周期太長，價格也貴。一咬牙，參考文獻(xiàn)自己搭了個簡易合成裝置。 核心用了臺老舊的DNA合成儀改裝，反應(yīng)柱、試劑瓶、閥門都是東拼西湊的。最難的是試劑的脫水處理，乙腈反復(fù)活化分子篩，三氯乙酸溶液要現(xiàn)配現(xiàn)用。第一次合成時DMT基團脫除不完全，后來發(fā)現(xiàn)是酸濃度梯度沒控制好。 目前合成長度還停留在15-20個堿基，粗產(chǎn)物用乙醇沉淀回收，HPLC分析純度大概70%左右。雖然跟商品化寡核苷酸合成服務(wù)沒法比，但做一些基礎(chǔ)修飾探針勉強夠用。 最頭疼的是亞磷酰胺試劑的保存。分裝后充氬氣冷凍，但總感覺活性在慢慢下降。蟲友們有沒有小包裝試劑的保存經(jīng)驗？ 說實話自己搞寡核苷酸合成純粹是被逼出來的，過程中各種小問題不斷。如果有類似經(jīng)驗的蟲友，歡迎交流合成中的坑和技巧。特別是長鏈合成和純化方面，有沒有什么土辦法能提高效率？ （注：特殊修飾或重要實驗建議還是找專業(yè)公司合成，自建裝置風(fēng)險較高） |
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