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muchongvip12鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
求助，3’utr區(qū)擴(kuò)增
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求助各位大佬，我是一名農(nóng)學(xué)類分子生物學(xué)研究生新生，我現(xiàn)在需要做大麥BSMV-VIGS試驗(yàn)，在設(shè)計(jì)引物的時(shí)候，我選用了多個(gè)片段但是特異性不是唯一，后續(xù)選用3‘UTR區(qū)域進(jìn)行設(shè)計(jì)引物，選用250bp作為我的沉默片段，經(jīng)過(guò)ncbi blast特異性，以及用primer測(cè)了發(fā)夾結(jié)構(gòu)，唯一特異性以及0發(fā)夾結(jié)構(gòu)，一對(duì)引物Tm在55，56但是我在擴(kuò)增的時(shí)候我從51到59設(shè)置的溫度梯度，以cdna作為模板怎么擴(kuò)都擴(kuò)不出來(lái)，為了驗(yàn)證不是cdna的問(wèn)題，我又用管家基因驗(yàn)證，出現(xiàn)正確條帶，排除cdna的問(wèn)題，我想問(wèn)問(wèn)各位大佬，3’Utr區(qū)域擴(kuò)增是否有什么注意事項(xiàng)? @biostar2009 @wizardfan @youlinglyw @飛約瘋?cè)嗽?/u> 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
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