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畢合生物2024銅蟲 (小有名氣)
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[交流]
給細胞來點"顏色"瞧瞧
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1 胸腺嘧啶類似物（EdU） EdU是一種胸腺嘧啶核苷類似物，可以理解為它會cosplay——核苷酸，在S期被傻傻分不清的細胞主動摻入到新合成的DNA鏈中。 EdU是BrdU法的升級版。將熒光標記（如FITC、Cy3、Cy5等）與EdU的炔基共價結(jié)合，在DNA合成時，EdU摻入，新合成的DNA就獲得了熒光標記，我們就可以根據(jù)熒光強度判定新合成了多少DNA。 這一染料常用于細胞增殖檢測，使用免疫熒光或流式細胞術(shù)檢測熒光強度�？膳c其它免疫熒光標記聯(lián)用，進行多色標記。 其優(yōu)點在于： 高靈敏度與特異性：只標記正在合成DNA的細胞，單細胞分辨率。 不破壞 DNA 結(jié)構(gòu)，兼容其它檢測，熒光外掛靈活：與BrdU（需要DNA酸變性或酶消化以暴露抗原）相比，EdU化學反應(yīng)不會破壞DNA結(jié)構(gòu)，對樣品幾乎無損。 因此允許與其它多種抗體或熒光蛋白同時標記，能夠同時檢測細胞其他性狀特征。 由于在EdU法中，熒光是由另外的熒光標記提供的，可以根據(jù)已確定的其它待測標志物，為EdU選擇一個在光譜上不沖突的通道。 2 小溝結(jié)合劑（Hoechst 系列, DAPI） Hoechst 33342和 Hoechst 33258 Hoechst 33342和Hoechst 33258是最常用的兩種，前者細胞膜通透性更強、細胞毒性較小，通常活細胞染色建議使用前者，固定細胞染色使用后者。Hoechst是一類小溝結(jié)合劑，與DNA的A-T富集區(qū)特異性結(jié)合。 由于是核染料，可用于檢測早期凋亡，染色后可以直接用熒光顯微鏡或流式細胞儀檢測熒光。 DAPI DAPI與Hoechst類似，也是小溝結(jié)合劑，優(yōu)先結(jié)合A-T富集區(qū)。但DAPI是死活染料，不能透過活細胞的細胞膜，主要用于固定后的細胞或組織染色。 DAPI與雙鏈DNA結(jié)合后產(chǎn)生的熒光強于與單鏈DNA結(jié)合所產(chǎn)生的熒光。相比Hoechst熒光更穩(wěn)定，不易淬滅，但亮度低一些。 DAPI最核心的應(yīng)用，就是在免疫熒光中用于核復染，或流式分析細胞周期。且與紅綠色通道分離度好，適合多色熒光搭配。 3 嵌入式染料（PI, 7-AAD, SYTOX等） PI PI也是經(jīng)典的死活染料，常用于流式細胞周期分析，AnnexinV/PI雙染是流式的基礎(chǔ)實驗之一。 PI是一類嵌入式染料，嵌入到核酸雙鏈之中。由于不能透過完整的細胞膜，所以只能標記死細胞或晚期凋亡細胞。 7-AAD 與PI類似，也是不能透過活細胞膜的嵌入式死活染料。它的發(fā)射光譜比PI更遠，更容易與FITC等常用染料搭配進行多色分析。 SYTOX 這是一種用于染死細胞核的染料。不能透過活細胞膜。一旦進入死細胞與DNA結(jié)合，熒光將大幅增強。有極高的靈敏度，適用于需要極高的死細胞標記場合。 畢合生物(www.bihebio.com)提供服務(wù)內(nèi)容：分子生物學、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學、材料化學、細胞資源庫與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學、天然產(chǎn)物 |
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