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| 【懸賞金幣】回答本帖問題,作者云云寸明將贈(zèng)送您 5 個(gè)金幣 | |||
云云寸明新蟲 (初入文壇)
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[求助]
引物設(shè)計(jì) 已有1人參與
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我想知道設(shè)計(jì)引物的時(shí)候引物如果包含同源臂 那么看GC含量的時(shí)候是需要看后面p的片段的引物?同源臂的引物整個(gè)的呢還是說只需要看要p的那個(gè)片段的20個(gè)nt的,不需要看同源臂的20個(gè)nt呢? 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
鐵蟲 (正式寫手)
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主要看后面擴(kuò)增基因?qū)?yīng)的引物序列,如果GC含量太高,引物容易結(jié)合模板非特異片段,擴(kuò)增出雜帶,如果GC含量太低,結(jié)合力弱,容易擴(kuò)增失敗;前面同源片段的GC含量也比較重要,如果GC含量太高,也容易將引物結(jié)合到非特定位置,導(dǎo)致擴(kuò)增失; 正常實(shí)驗(yàn)不需要考慮這么多,如果擴(kuò)增出現(xiàn)問題,就先用不帶同源臂的擴(kuò)增特定基因,然后以擴(kuò)增出基因?yàn)槟0,用加了同源臂的引物擴(kuò)增,可以避免特異性差的問題。 |
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