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wangershui鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助 circrna表達(dá)量選取以及RnaseR實(shí)驗(yàn)
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我用生信篩選出乳腺癌中差異表達(dá)的circRNA, 用RT-qPCR檢測(cè)表達(dá)量，但是每次目的CT值都在30左右，甚至更高。內(nèi)參用的GAPDH在16-18左右，我用文獻(xiàn)里的一個(gè)circRNA的引物做對(duì)照，這個(gè)circRNA找的不夠好引物不特異，ct值也在30左右。我想咨詢一下相關(guān)大佬，circRNA的絕對(duì)表達(dá)量都這么低的嗎，還是有高的，如果表達(dá)量低還能做嗎。 我做RnaseR實(shí)驗(yàn)，用PCR跑40個(gè)循環(huán)才有一條較淺的條帶，而RnaseR陽(yáng)性的一點(diǎn)條帶都沒(méi)有了，請(qǐng)問(wèn)大家都是什么情況，是我的目的基因量太少做出來(lái)不明顯還是說(shuō)這個(gè)circRNA不耐受RnaseR酶，或者壓根就不是環(huán)狀RNA是線性RNA. 后續(xù)我又在做核質(zhì)分離提取RNA實(shí)驗(yàn)，目前還在探索，核質(zhì)提完RNA大家的CT值都在多少，如果我的還是30出頭還能使用嗎？ 最近做的siRNA敲低，想跳過(guò)前面的驗(yàn)證直接看細(xì)胞上有沒(méi)有用，大家有什么好的建議嗎，我做的腫瘤細(xì)胞，用的opti-mem培養(yǎng)基12h后細(xì)胞都死掉了，可能是密度很低，也可能是腫瘤細(xì)胞不耐受，我在這里直接轉(zhuǎn)染可以嗎 轉(zhuǎn)染后還是要做RT-qPCR來(lái)驗(yàn)證敲低效率，RT-qPCR真的對(duì)我來(lái)說(shuō)很頭大，組里老師說(shuō)我的CT太大了超過(guò)30就是假的 真的是這樣嗎 |
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