 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 2 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2122 | 回復(fù): 1 | |||
夏末～易科新蟲 (小有名氣)
|
[交流]
WB實(shí)驗(yàn)原理及流程 已有1人參與
|
|
WB實(shí)驗(yàn)原理及流程 Western Blot（WB）實(shí)驗(yàn)原理及流程圖 一、實(shí)驗(yàn)原理 Western Blot（免疫印跡）是一種用于檢測特定蛋白質(zhì)在復(fù)雜樣本中表達(dá)水平的技術(shù)。其原理基于以下三個(gè)核心步驟： 1. 蛋白質(zhì)分離 通過 SDS-PAGE 凝膠電泳 將蛋白質(zhì)按分子量大小分離。 SDS（十二烷基硫酸鈉）使蛋白質(zhì)攜帶大量負(fù)電荷，掩蓋天然電荷差異，確保分離僅基于分子量。 PAGE（聚丙烯酰胺凝膠電泳）提供分子篩效應(yīng)，小分子量蛋白遷移更快，大分子量蛋白遷移更慢。 2. 蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)膜 將凝膠中分離的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到 固相載體膜（如 PVDF 膜或 NC 膜）上，便于后續(xù)抗體結(jié)合。 常用轉(zhuǎn)膜方法：濕轉(zhuǎn)法（傳統(tǒng)）或半干轉(zhuǎn)法（快速）。 3. 抗體檢測 一抗：特異性識別目標(biāo)蛋白的抗體。 二抗：攜帶標(biāo)記（如 HRP 酶、熒光基團(tuán)）的抗體，識別一抗的 Fc 段。 信號檢測：通過化學(xué)發(fā)光（ECL）或熒光顯色，使目標(biāo)蛋白條帶可視化。 二、實(shí)驗(yàn)流程圖 textCopy Code 1. 樣品制備 │ ↓ 2. SDS-PAGE 電泳分離蛋白質(zhì) │ ↓ 3. 轉(zhuǎn)膜（將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上） │ ↓ 4. 封閉（5% 脫脂牛奶或 BSA，阻斷非特異性結(jié)合） │ ↓ 5. 一抗孵育（特異性結(jié)合目標(biāo)蛋白） │ ↓ 6. 洗滌（去除未結(jié)合的一抗） │ ↓ 7. 二抗孵育（標(biāo)記的二抗結(jié)合一抗） │ ↓ 8. 洗滌（去除未結(jié)合的二抗） │ ↓ 9. 檢測（ECL 化學(xué)發(fā)光或熒光成像） 三、關(guān)鍵步驟詳解 1. 樣品制備 裂解細(xì)胞/組織，提取總蛋白，測定濃度后與上樣緩沖液混合并煮沸變性。 2. 電泳 上樣后通電，小分子量蛋白遷移至凝膠下端（可根據(jù)預(yù)染 Marker 判斷分離效果）。 3. 轉(zhuǎn)膜 電流方向垂直于凝膠平面，蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移至膜上（需確認(rèn)轉(zhuǎn)膜效率，如麗春紅染色）。 4. 封閉 使用封閉液（如脫脂牛奶）覆蓋膜表面，減少抗體非特異性吸附。 5. 抗體孵育 一抗孵育常需過夜（4℃），二抗孵育時(shí)間較短（室溫 1-2 小時(shí)）。 6. 信號檢測 化學(xué)發(fā)光法：HRP 催化底物發(fā)光，通過膠片或成像系統(tǒng)捕獲信號。 四、注意事項(xiàng) 對照設(shè)置：需包含陰性對照（無目標(biāo)蛋白樣本）、內(nèi)參（如 β-actin/GAPDH）及空白對照。 抗體選擇：驗(yàn)證一抗特異性，避免交叉反應(yīng)。 時(shí)間控制：轉(zhuǎn)膜時(shí)間過長可能導(dǎo)致小分子量蛋白穿透膜。 發(fā)自小木蟲手機(jī)客戶端 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
如何高效的測量腺病毒的粒徑和電位
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
26在職申博—生物與醫(yī)藥—抗體/ADC藥物方向，江浙滬，有項(xiàng)目，可帶資。
已經(jīng)有1人回復(fù)
-
藥物學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有56人回復(fù)
-
288分求調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
滴滴Grace合肽庫
金蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 1689.3
- 散金: 226
- 沙發(fā): 2
- 帖子: 808
- 在線: 72.3小時(shí)
- 蟲號: 23321770
- 注冊: 2020-08-05
- 專業(yè): 外國語言
2樓2025-06-05 08:56:46
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 夏末～易科 的主題更新
| 2 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +7 | BrightLL 2026-03-02 | 9/450 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿天津大學(xué)085600 319分 材料與化工 金屬方向 求調(diào)劑 +4 | 青科11 2026-03-02 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)碩318求調(diào)劑 +11 | February_Feb 2026-03-01 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 278求調(diào)劑 +3 | 滿天星11_22 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 281電子信息求調(diào)劑 +3 | jhtfeybgj 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑 +5 | 13853210211 2026-03-02 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑 +7 | axyz3 2026-02-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 0854復(fù)試調(diào)劑 276 +5 | wmm9 2026-03-01 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑一志愿東北林業(yè)大學(xué)材料與化工英二數(shù)二 +5 | 蟲蟲蟲蟲蟲7 2026-03-01 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 0854總分272 +3 | 打小就是老實(shí)人 2026-03-02 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料與化工328求調(diào)劑 +3 | 。，。，。，。i 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 熬夜的貓頭鷹 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +8 | 19171856320 2026-02-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 281求調(diào)劑 +5 | 2026計(jì)算機(jī)_誠心 2026-03-01 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 化工專碩342，一志愿大連理工大學(xué)，求調(diào)劑 +6 | kyf化工 2026-02-28 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 279求調(diào)劑 +3 | dua1 2026-03-01 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0856材料求調(diào)劑 +4 | 麻辣魷魚 2026-02-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 313求調(diào)劑 +3 | 水流年lc 2026-02-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 295復(fù)試調(diào)劑 +3 | 簡木ChuFront 2026-03-01 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑 +3 | 簡木ChuFront 2026-02-28 | 3/150 |
|