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生物前沿研究室新蟲(chóng) (小有名氣)
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實(shí)驗(yàn)室干貨｜手把手教你用BCA法精準(zhǔn)測(cè)定蛋白濃度！
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想快速掌握BCA蛋白定量技術(shù)？這份超詳細(xì)實(shí)操指南別錯(cuò)過(guò)！ 實(shí)驗(yàn)全流程 1?? 96孔板預(yù)處理：先給孔板貼上清晰標(biāo)簽，標(biāo)準(zhǔn)品孔加入20μL PBS打底，樣品孔則加入18μL PBS，為后續(xù)上樣打好基礎(chǔ)。 2?? 樣品添加：取2μL已稀釋10倍的蛋白樣品，精準(zhǔn)加入樣品孔�？刂坪线m濃度是獲取準(zhǔn)確結(jié)果的關(guān)鍵！ 3?? 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：在首個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品孔注入20μL 2μg/μL標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液，通過(guò)梯度稀釋構(gòu)建濃度梯度（最后一孔不加樣）。 4?? 工作液配制：按實(shí)際孔數(shù)+5個(gè)冗余量，將BCA試劑A液與B液以50:1比例混合，每孔加入200μL，確保加樣量一致。 5?? 氣泡處理：用針頭小心戳破液面氣泡，避免影響反應(yīng)效果和讀數(shù)準(zhǔn)確性。 6?? 恒溫孵育：將96孔板置于37℃孵箱反應(yīng)30分鐘，等待蛋白與BCA試劑充分反應(yīng)顯色。 7?? 結(jié)果檢測(cè)：孵育完成后，立即使用酶標(biāo)儀在562nm波長(zhǎng)下讀取各孔吸光度，數(shù)值越高代表蛋白濃度越高。 ?? DLab實(shí)驗(yàn)中心特別提醒 ? 試劑使用：標(biāo)準(zhǔn)品可低溫保存，但BCA工作液必須現(xiàn)配現(xiàn)用 ? 數(shù)據(jù)可靠：每個(gè)樣品至少設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，異常值需剔除 ? 標(biāo)準(zhǔn)曲線：每次實(shí)驗(yàn)都要重新繪制，注意坐標(biāo)軸對(duì)應(yīng)關(guān)系 ? 操作規(guī)范：加樣需精準(zhǔn)，避免產(chǎn)生氣泡，加樣后輕晃混勻 ? 及時(shí)檢測(cè)：孵育結(jié)束后盡快讀數(shù)，防止吸光值發(fā)生變化 ? 濃度控制：提前預(yù)估樣品濃度，確保在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)，記錄稀釋倍數(shù) 掌握這些要點(diǎn)，BCA蛋白定量實(shí)驗(yàn)輕松搞定！? #科研干貨 #實(shí)驗(yàn)室技能 #BCA法 #蛋白濃度測(cè)定 #科研日常 #實(shí)驗(yàn)操作指南 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
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