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畢合生物2024銅蟲(chóng) (小有名氣)
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🌟巨噬細(xì)胞純化：科研小白也能輕松上手
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做細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，有沒(méi)有被巨噬細(xì)胞純化的問(wèn)題困擾過(guò)？今天就來(lái)給大家嘮嘮巨噬細(xì)胞純化的兩種超實(shí)用方法，讓你輕松搞定！ 一、巨噬細(xì)胞純化是個(gè)啥？ 巨噬細(xì)胞也叫組織細(xì)胞，是由血液中的單核細(xì)胞分化而來(lái)的。它們?cè)诿庖呦到y(tǒng)里超重要，能吞噬病原體和細(xì)胞碎片，是身體的“清潔工”。純化巨噬細(xì)胞，就是要把它們從其他細(xì)胞里分離出來(lái)，方便后續(xù)研究。就像從一盤(pán)沙子里挑出金子，巨噬細(xì)胞就是那閃閃發(fā)光的金子！ 二、巨噬細(xì)胞純化的兩種方法：貼壁法和梯度離心法 貼壁法純化巨噬細(xì)胞 配制細(xì)胞懸液：用含20%-40%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液，把巨噬細(xì)胞配成2×10⁶～4×10⁶/ml的濃度。然后把細(xì)胞懸液接種到培養(yǎng)皿中，37℃、5% CO₂培養(yǎng)箱里培養(yǎng)1小時(shí)或24小時(shí)。1小時(shí)培養(yǎng)節(jié)省時(shí)間，但會(huì)丟失一些粘附力弱的細(xì)胞；24小時(shí)可以得到更多細(xì)胞。20%-40%的小牛血清能減少B淋巴細(xì)胞的粘附。 去除未粘附細(xì)胞：搖晃培養(yǎng)皿，懸浮未粘附的細(xì)胞，吸出細(xì)胞懸液。用預(yù)溫的Hanks液洗滌細(xì)胞3-4次。懸浮細(xì)胞可以重復(fù)粘附，得到更多巨噬細(xì)胞。 消化和洗滌細(xì)胞：用含2.5mmol/L EDTA的無(wú)鈣鎂Hanks液消化細(xì)胞，37℃處理15-30分鐘。用吸管吹打分離細(xì)胞，離心（250×g，10分鐘），去上清液。然后用預(yù)冷的Hanks液洗滌細(xì)胞3-4次，每次離心250×g，10分鐘，去上清液。最后用含10%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞，臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)細(xì)胞并決定細(xì)胞活力，將細(xì)胞配成所需的濃度。 梯度離心法純化巨噬細(xì)胞 制備密度梯度：取15ml離心管，將制備好的各濃度密度梯度材料按下濃上淡的順序依次分層加在離心管中，每個(gè)濃度2ml。最后加上巨噬細(xì)胞懸液3-5ml（約含2×10⁷～5×10⁷細(xì)胞）。 離心和洗滌細(xì)胞：4℃中，水平離心1000×g，30分鐘。垂直取出離心管，小心吸出各交界面的細(xì)胞。分別用預(yù)冷的含1%小牛血清RPMI-1640培養(yǎng)液洗滌各交界面細(xì)胞2次，每次200×g，10分鐘。最后用含10%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液將細(xì)胞配成所需的濃度。 三、總結(jié)：巨噬細(xì)胞純化，科研小白也能輕松搞定！ 巨噬細(xì)胞純化雖然聽(tīng)起來(lái)有點(diǎn)復(fù)雜，但只要按照步驟來(lái)，就能輕松搞定！貼壁法適合快速得到一部分巨噬細(xì)胞，梯度離心法能得到更純的細(xì)胞。兩種方法各有優(yōu)勢(shì)，可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇哦！ 畢合生物提供服務(wù)內(nèi)容：分子生物學(xué)、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學(xué)、材料化學(xué)、細(xì)胞資源庫(kù)與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學(xué)、天然產(chǎn)物 |
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