 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1530 | 回復(fù): 0 | |||
青云1234新蟲 (小有名氣)
|
[交流]
人 8 羥基脫氧鳥苷（8-OHdG）定量檢測(cè)試劑盒（ELISA）的原理與應(yīng)用
|
|
人 8 羥基脫氧鳥苷（8-OHdG）定量檢測(cè)試劑盒（ELISA）的原理與應(yīng)用 摘要：本文詳細(xì)介紹了人 8 羥基脫氧鳥苷（8-OHdG）定量檢測(cè)試劑盒（ELISA）的實(shí)驗(yàn)原理、試劑盒組分、樣本采集與保存、檢驗(yàn)方法、性能指標(biāo)以及生物安全注意事項(xiàng)等內(nèi)容，該試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好等特點(diǎn)，僅供科研使用。 一、引言 8-OHdG 是 DNA 氧化損傷的重要標(biāo)志物之一，其含量的變化與多種疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。人 8 羥基脫氧鳥苷（8-OHdG）定量檢測(cè)試劑盒（ELISA）為科研人員提供了一種準(zhǔn)確、快速檢測(cè)血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織中 8-OHdG 含量的方法，對(duì)于相關(guān)疾病的研究具有重要意義。 二、實(shí)驗(yàn)原理 試劑盒采用酶聯(lián)免疫分析方法中的競(jìng)爭(zhēng)抑制反應(yīng)原理。首先，純化的抗 8 羥基脫氧鳥苷（8-OHdG）抗體包被微孔板，生物素標(biāo)記 8 羥基脫氧鳥苷（8-OHdG）作為檢測(cè)抗原。在反應(yīng)體系中，一定量的固相抗體與生物素標(biāo)記的 8-OHdG 及非標(biāo)記抗原（校準(zhǔn)品或標(biāo)本）進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，當(dāng)非標(biāo)記抗原量多時(shí)，抗體與生物素標(biāo)記的 8-OHdG 結(jié)合就少，反之結(jié)合就多。反應(yīng)平衡后，形成固相抗體 - 生物素化 8 羥基脫氧鳥苷（8-OHdG）- 酶標(biāo) - 親合素復(fù)合物。經(jīng)加底物顯色后，用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值）。隨著 8-OHdG 濃度的升高，OD 值逐漸下降呈良好的線性關(guān)系，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線方程即可計(jì)算出樣品中 8-OHdG 的含量。 三、試劑盒組分與保存 組分：試劑盒包含校準(zhǔn)品 0.5ml / 管 * 6 管，其為抗原配制的 6 個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)品，濃度依次為 48、24、12、6、3、0ng/mL；96T/48T 的預(yù)包被固相抗體的包被微孔板；6mL 的 HRP 標(biāo)記的檢測(cè)抗體；6mL 的檢測(cè)抗原生物素化抗原；6mL 的過氧化脲工作液底物液 A 和 6mL 的 TMB 工作液底物液 B；6mL 的 2mol/L 稀釋液終止液；6mL 的 PBS 樣本稀釋液；30mL 的含 0.15% Tween20 的 PBS 20× 濃縮洗滌液以及說明書、自封袋、不干膠等。 保存條件：未開封的試劑盒需保存在 2-8 度，不得使用過期試劑盒。 四、樣本的采集和儲(chǔ)存 采集方法： 細(xì)胞培養(yǎng)上清：在 4000rpm 條件下離心 20min，去除細(xì)胞顆粒和聚合物，上清液保存在 20℃以下，避免反復(fù)凍融。 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，4000rpm 條件下離心 20min，小心地分離出血清，保存在 - 20℃以下，避免反復(fù)凍融。 血漿：采用肝素，EDTA，或檸檬酸鈉作為抗凝劑，在 4000rpm 條件下，離心 20 分鐘取上清，血漿保存在 - 20℃以下，避免反復(fù)凍融。 組織：用預(yù)冷的 PBS (0.01 M,pH=7.4) 沖洗組織，去除殘留血液，稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的 PBS 加入玻璃勻漿器中，在冰上充分研磨，可進(jìn)一步對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎或反復(fù)凍融，最后將勻漿液 5000×g 離心 5-10 分鐘，取上清檢測(cè)。 保存條件和穩(wěn)定性：樣本在 2-8℃條件下，可以儲(chǔ)存 72h，或者在 - 20℃儲(chǔ)存 6 個(gè)月。樣本收集后，若不是一次檢測(cè)完，應(yīng)按一次用量分裝凍存，避免反復(fù)凍融，使用時(shí)在室溫下解凍，確保樣品均勻充分解凍。 五、檢驗(yàn)方法 試劑準(zhǔn)備：將各種試劑移至室溫平衡兩小時(shí)，取濃縮洗滌液，根據(jù)當(dāng)批檢測(cè)數(shù)量，用蒸餾水 1：20 稀釋，混勻后備用。 加樣：將預(yù)包被板從密封袋中取出，設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，不加任何液體；每個(gè)校準(zhǔn)品設(shè) 2 孔，每孔加入對(duì)應(yīng)校準(zhǔn)品 50μl；其余每個(gè)檢測(cè)孔直接加待測(cè)血清或質(zhì)控品 50μl。除空白孔外所有孔加入生物素化抗原 50μl，混勻，貼上封板膜，置 37℃溫育 60 分鐘。 洗板：可采用手工洗板或洗板機(jī)洗板，均需重復(fù) 3 次后拍干。手工洗板時(shí)，棄去孔內(nèi)液體，洗滌液注滿各孔，靜置 10 秒甩干；洗板機(jī)洗板時(shí)，選擇洗滌 3 次程序洗板后拍干。 顯色與終止反應(yīng)：每孔加入酶標(biāo)親合素 50μl（空白對(duì)照孔除外），混勻，貼上封板膜，置 37℃溫育 30 分鐘。之后每孔加顯色劑 A 50μl，顯色劑 B 50μl，振蕩混勻后，置 37℃避光顯色 15 分鐘，每孔加終止液 50μl。 結(jié)果測(cè)定與計(jì)算：用酶標(biāo)儀讀數(shù)，取波長(zhǎng) 450nm，先用空白對(duì)照孔調(diào)零點(diǎn)，然后測(cè)定各孔光密度值（OD 值）。以標(biāo)準(zhǔn)品濃度做為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的吸光度（OD 值）作為橫坐標(biāo)，利用計(jì)算機(jī)軟件，采用四參數(shù) Logistic 曲線擬合（4-pl），創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，通過樣本的吸光度（OD 值），利用方程計(jì)算樣品的濃度值。若樣品被稀釋，需將測(cè)得的濃度值乘以稀釋倍數(shù)，才是樣品的最終濃度。 六、試劑盒性能指標(biāo) 物理性能：液體組分應(yīng)澄清，無沉淀或絮狀物；所有組分應(yīng)無包裝破損，各組分裝量不少于組分表中要求。 劑量反應(yīng)曲線線性：用四參數(shù) Logistic 曲線擬合（4-pl），劑量 - 反應(yīng)曲線相關(guān)系數(shù)（r）的絕對(duì)值應(yīng)不低于 0.9900。 精密度：批內(nèi)精密度和批間精密度的變異系數(shù) CV% 均小于 15%。 靈敏度：最低檢出限應(yīng)不高于 0.1ng/mL。 回收率：在 85%-115% 之間。 穩(wěn)定性：在 2℃-8℃保存，有效期為 6 個(gè)月。 檢測(cè)范圍：為 3 ng/mL – 48 ng/mL。 七、生物安全注意事項(xiàng) 檢測(cè)必須符合實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范的規(guī)定，嚴(yán)格防止交叉污染，所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應(yīng)按照傳染物進(jìn)行處置。 試劑盒的液體組分中，含有 proclin-300 防腐劑，可能引起皮膚過敏反應(yīng)，避免吸入煙霧與皮膚接觸。 底物液對(duì)皮膚、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入煙霧。 實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)戴上防護(hù)手套，實(shí)驗(yàn)完成后徹底洗手。 八、結(jié)論 人 8 羥基脫氧鳥苷（8-OHdG）定量檢測(cè)試劑盒（ELISA）是一種性能優(yōu)良的科研工具，具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好、操作簡(jiǎn)單、快速等特點(diǎn)，可準(zhǔn)確檢測(cè)多種樣本中的 8-OHdG 含量，但需嚴(yán)格按照說明書操作，并注意生物安全防護(hù)，僅供科研使用，不得用于臨床診斷。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
0857求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
295求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
一志愿中南大學(xué)理學(xué)化學(xué)
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
085600 材料與化工 298
已經(jīng)有11人回復(fù)
-
281求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
0856材料與化工，270求調(diào)劑
已經(jīng)有14人回復(fù)
-
331求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
一志愿鄭州大學(xué)，學(xué)碩，物理化學(xué)， 333求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
成果系統(tǒng)訪問量大，請(qǐng)15分鐘后再嘗試。由此給您造成的不便，敬請(qǐng)諒解。
已經(jīng)有11人回復(fù)
-
0703化學(xué) 一志愿東北大學(xué) 279分求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 青云1234 的主題更新
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 264求調(diào)劑 +3 | thext 2026-03-03 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研]
材料325求調(diào)劑
 30+5
|
mariusuki 2026-03-02 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 312求調(diào)劑 +3 | 醋精華了一下發(fā)?/a> 2026-03-03 | 5/250 |
|
|
|
[考研]
085600 英一數(shù)二272求調(diào)劑
5+6
|
vida_a 2026-03-01 | 45/2250 |
|
|
[考研] 接收調(diào)劑 +15 | 津萌津萌 2026-03-02 | 23/1150 |
|
|
|
[考研] 復(fù)試調(diào)劑 +4 | 杰尼龜aaa 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 276求調(diào)劑 +8 | 路lyh123 2026-02-28 | 10/500 |
|
|
|
[基金申請(qǐng)] 沒有青基直接申請(qǐng)面上，感覺自己瘋了 +5 | kevin63t 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿天津大學(xué)085600 319分 材料與化工 金屬方向 求調(diào)劑 +4 | 青科11 2026-03-02 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 化工270求調(diào)劑 +10 | 什么名字qwq 2026-03-02 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 化工335求調(diào)劑 +5 | 摸摸貓貓頭 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 290分材料工程085601求調(diào)劑 數(shù)二英一 +8 | llx0610 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 272求調(diào)劑 +9 | 材紫有化 2026-02-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 085600材料工程一志愿中科大總分312求調(diào)劑 +9 | 吃宵夜1 2026-02-28 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 材料284求調(diào)劑，一志愿鄭州大學(xué)英一數(shù)二專碩 +15 | 想上岸的土撥鼠 2026-02-28 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 306分材料調(diào)劑 +5 | chuanzhu川燭 2026-03-01 | 6/300 |
|
|
|
[考博] 博士自薦 +4 | kkluvs 2026-02-28 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 熬夜的貓頭鷹 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 272求調(diào)劑 +6 | 田智友 2026-02-28 | 6/300 |
|
|
|
[高分子] 求環(huán)氧樹脂研發(fā)1名 +3 | 孫xc 2026-02-25 | 11/550 |
|