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過期的匹薩新蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助一個構(gòu)建CHO穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系的問題
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| 用的CHO-S細胞系,使用piggybac轉(zhuǎn)座子想要導(dǎo)入一個目的基因構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系,按照文章中的方法進行實驗,兩種質(zhì)粒質(zhì)量比donor : helper=9 : 1,轉(zhuǎn)染使用了PEI和脂質(zhì)體的化轉(zhuǎn)法,48h后更換培養(yǎng)基為含有10 μg/mL嘌呤霉素的培養(yǎng)基篩選。目前問題是篩選過程中前兩天細胞還算正常,第三天或者第四天時細胞會出現(xiàn)大批量死亡,基本最后就沒有幸存的了。另外這個質(zhì)粒上有帶GFP,轉(zhuǎn)染完成后觀察GFP熒光強度還是比較好的,隨著篩選逐漸綠色的細胞越來越少了,求助一下怎么辦,哪里可能出了問題,轉(zhuǎn)染陽性率太低。 |
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