 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2707 | 回復(fù): 0 | |||
承接實(shí)驗(yàn)外包鐵蟲(chóng) (初入文壇)
|
[交流]
研究生必須掌握的：qPCR引物設(shè)計(jì)原則
|
|
引物設(shè)計(jì)是定量PCR中的關(guān)鍵，引物的好壞會(huì)直接影響最終的結(jié)果，今天跟各位小伙伴分析qPCR引物設(shè)計(jì)的原則： 圖片 1.引物長(zhǎng)度：一般引物長(zhǎng)度在15-30堿基之間，引物長(zhǎng)度過(guò)短可能導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增，過(guò)長(zhǎng)可能形成二級(jí)結(jié)構(gòu)或影響Taq DNA聚合酶的延伸效率。 2.GC含量的要求：GC含量是指引物中鳥(niǎo)嘌呤（G）和胞嘧啶（C）堿基的比例。GC含量在40%-60%之間為宜，過(guò)高或過(guò)低都不利于PCR反應(yīng)的引發(fā)和延伸。 3.Tm值：Tm值是指引物在特定鹽濃度條件下，50%雙鏈解鏈的溫度。上下游引物的Tm值相差最好不超過(guò)3℃（一般在55℃-60℃之間）。 4.堿基選擇：3'端最好選擇T堿基，因?yàn)門(mén)在錯(cuò)配情況下的引發(fā)效率較低。避免選擇A堿基，因?yàn)锳在錯(cuò)配時(shí)也能有效引發(fā)鏈的合成；避免3'端連續(xù)出現(xiàn)3個(gè)以上的G或C堿基，以防止引物在GC富集序列區(qū)錯(cuò)誤引發(fā)。 5.堿基隨機(jī)分布：引物序列中的堿基應(yīng)隨機(jī)分布，避免出現(xiàn)聚嘌呤（如GGGG）或聚嘧啶（如CCCC）的現(xiàn)象，以減少非特異性擴(kuò)增的可能性。 6.避免二級(jí)結(jié)構(gòu)：引物自身及引物之間不應(yīng)存在互補(bǔ)序列，以避免形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)或引物二聚體。這些二級(jí)結(jié)構(gòu)會(huì)影響引物與模板的復(fù)性結(jié)合，降低PCR反應(yīng)效率。 圖片 7.擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度：擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度應(yīng)控制在80-300 bp之間，其中80-150 bp最為合適。過(guò)長(zhǎng)的產(chǎn)物可能會(huì)影響擴(kuò)增效率，增加非特異性擴(kuò)增的風(fēng)險(xiǎn)；而過(guò)短的產(chǎn)物則可能難以準(zhǔn)確檢測(cè)和分析。 8. 特異性檢測(cè): 引物設(shè)計(jì)完成后，應(yīng)進(jìn)行BLAST檢測(cè)等特異性驗(yàn)證步驟，以確保引物與其他基因不具有互補(bǔ)性，從而提高引物的特異性,有助于減少非特異性擴(kuò)增和假陽(yáng)性結(jié)果的發(fā)生。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
推薦一些20種氨基酸檢測(cè)的實(shí)際應(yīng)用案例
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有218人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 承接實(shí)驗(yàn)外包 的主題更新
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 276求調(diào)劑 +8 | 路lyh123 2026-02-28 | 10/500 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑 +3 | 人間唯你是清歡 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
[考研] 材料328求調(diào)劑 +4 | 一個(gè)蘿卜02 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085602化學(xué)工程350，調(diào)劑，有沒(méi)有211的 +5 | 利好利好. 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 成績(jī)276，專(zhuān)業(yè)代碼0856求調(diào)劑 +7 | 小陳朵 2026-03-03 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿中科大能動(dòng)297求調(diào)劑，本科川大 +3 | 邵11 2026-03-03 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑 +5 | 13853210211 2026-03-02 | 7/350 |
|
|
|
[論文投稿]
通訊作者寫(xiě)誰(shuí)，問(wèn)題是你意想不到的問(wèn)題
 15+3
|
阿爾法啊 2026-03-01 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑院校 +6 | 云朵452 2026-03-02 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 11408，學(xué)碩276求調(diào)劑 +3 | 崔wj 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0856材料調(diào)劑 +5 | 沿岸有貝殼OUC 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考博] 博士自薦 +4 | kkluvs 2026-02-28 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料085601調(diào)劑 +5 | 多多子. 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 291 求調(diào)劑 +3 | 化工2026屆畢業(yè)?/a> 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 化工專(zhuān)碩342，一志愿大連理工大學(xué)，求調(diào)劑 +6 | kyf化工 2026-02-28 | 7/350 |
|
|
|
[基金申請(qǐng)]
 本子寫(xiě)完了，給DS兄弟看了，得了92分
+3
|
Doma 2026-03-01 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 化工299分求調(diào)劑 一志愿985落榜 +5 | 嘻嘻(*^ω^*) 2026-03-01 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0856材料求調(diào)劑 +4 | 麻辣魷魚(yú) 2026-02-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 317一志愿華南理工電氣工程求調(diào)劑 +6 | Soliloquy_Q 2026-02-28 | 11/550 |
|
|
|
[論文投稿]
求助coordination chemistry reviews 的寫(xiě)作模板
10+3
|
ljplijiapeng 2026-02-27 | 4/200 |
|