 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1431 | 回復(fù): 0 | |||
承接實驗外包鐵蟲 (初入文壇)
|
[交流]
IP ,COI-IP, PULL-down的區(qū)別和作用
|
|
一、免疫沉淀（IP） 圖片 ①加入合適的抗體。 ②抗體與目標(biāo)蛋白結(jié)合 ③蛋白質(zhì)A或G,使抗體-蛋白質(zhì)復(fù)合物不溶。 ④通過離心分離抗體-蛋白復(fù)合物，去除油脂等污染物并進行必要的清洗步驟。 免疫沉淀技術(shù)是一種經(jīng)典方法，它基于抗體和抗原之間的特異性相互作用。這項技術(shù)被廣泛應(yīng)用于探究蛋白質(zhì)相互作用、蛋白質(zhì)與遺傳物質(zhì)之間的相互作用。通過免疫沉淀技術(shù)，可以有效確定兩種蛋白質(zhì)在完整細胞內(nèi)的生理性相互作用，同時也是用于抗原檢測和蛋白質(zhì)純化的重要方法之一。除此之外，CO-IP（共沉淀法）、CHIP（染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)）、RIP（RNA免疫沉淀技術(shù)）等技術(shù)都是由免疫沉淀技術(shù)演變而來的。 原理:免疫沉淀（Immunoprecipitation，簡稱IP）原理是利用特定抗體與目標(biāo)蛋白結(jié)合，并將其從混合物中沉淀出來，進而實現(xiàn)對蛋白的純化與鑒定。 作用:富集和檢測某一特定蛋白，為后續(xù)分析提供高純度的樣本。 應(yīng)用:免疫沉淀主要用于研究蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)的相互作用，有助于揭示蛋白質(zhì)復(fù)合物的組成。IP技術(shù)側(cè)重于研究蛋白質(zhì)復(fù)合物，適用于探究特定蛋白質(zhì)的結(jié)合伙伴以及研究信號通路。 二、免疫共沉淀（CO-IP） 圖片 免疫共沉淀技術(shù)是一種有效的方法，用于研究體內(nèi)兩種蛋白是否相互作用。該技術(shù)通過與已知蛋白結(jié)合的抗體來捕獲整個已知蛋白復(fù)合物，從而研究與已知蛋白相互作用的其他蛋白。 原理:在免疫共沉淀技術(shù)的基礎(chǔ)上，CO-IP通過特定抗體沉淀出與目標(biāo)蛋白相互作用的其他蛋白質(zhì)，揭示了這些蛋白質(zhì)之間的相互關(guān)系。 作用:該技術(shù)的作用是檢測兩種蛋白是否在體內(nèi)相互作用。 應(yīng)用:免疫共沉淀技術(shù)可應(yīng)用于構(gòu)建蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)，從而發(fā)現(xiàn)目標(biāo)蛋白的結(jié)合伙伴。此技術(shù)適用于鑒定特定蛋白質(zhì)的相互作用伙伴，有助于了解蛋白質(zhì)的功能和信號傳導(dǎo)機制。 三、融合蛋白沉降試驗（Pull-down） 圖片 Pull-down是一種常用的體外蛋白相互作用檢測方法，可用于驗證已知蛋白之間的相互作用，并且適用于篩選那些可能與已知蛋白相互作用的未知蛋白。 原理:其原理是將與特定標(biāo)簽（如GST標(biāo)簽、His標(biāo)簽和生物素標(biāo)簽）融合的蛋白固定在親和樹脂上作為誘餌蛋白。當(dāng)目標(biāo)蛋白或細胞裂解液經(jīng)過時，能與誘餌蛋白結(jié)合的獵物蛋白會被捕獲并沉降下來。經(jīng)過洗脫后，通過蛋白印跡或質(zhì)譜分析，可以驗證預(yù)測的蛋白相互作用或發(fā)現(xiàn)未知的相互作用。 作用:這種方法的作用在于檢測兩種蛋白在體外是否發(fā)生直接結(jié)合。 應(yīng)用  ull-down方法的應(yīng)用主要體現(xiàn)在兩個方面：一是驗證兩種已知蛋白之間潛在的相互作用；二是用于發(fā)現(xiàn)可以與已知蛋白發(fā)生相互作用的未知蛋白。四、CO-IP、Pull-down的優(yōu)缺點 1.IP常用3種抗體的優(yōu)缺點 圖片 2.CO-IP的優(yōu)缺點 優(yōu)點:（1）在CO-IP分析中，誘餌蛋白和獵物蛋白展現(xiàn)出的是它們在體內(nèi)天然的構(gòu)象，這有助于更真實地模擬它們之間的相互作用。 （2）誘餌蛋白與獵物蛋白的相互作用發(fā)生在體內(nèi)，受外界影響相對較小，這有利于排除干擾因素。 （3）實驗中已有相應(yīng)的抗體，整個分析過程可以快速高效地進行，無需進行蛋白的克隆和異源表達。 缺點:（1）當(dāng)?shù)鞍组g的相互作用具有較低的親和力或是短暫的情況時，這種相互作用可能無法被有效地檢測到。 （2）由于無法完全排除其他蛋白參與的可能性，CO-IP的結(jié)果可能無法確定蛋白之間的相互作用是直接的還是間接的。 （3）CO-IP方法并非通用的方法，使用過程中需要具備特定的抗體支持。 3.Pull-down的優(yōu)缺點 優(yōu)點:（1）能夠有效純化低豐度蛋白質(zhì)復(fù)合物，這對于分析和研究特定蛋白質(zhì)相互作用具有重要意義。 （2）Pull-down技術(shù)還被廣泛運用于體外轉(zhuǎn)錄或翻譯系統(tǒng)的研究中，為研究者提供了有效的工具。 缺點:（1）蛋白質(zhì)標(biāo)簽的引入可能會影響與內(nèi)源性復(fù)合物的競爭結(jié)果，這可能導(dǎo)致對實驗結(jié)果的誤解。 （2）雖然Pull-down技術(shù)能夠幫助檢測蛋白質(zhì)間的相互作用，但實際上這并不能真正反映蛋白質(zhì)之間在生理上是否存在結(jié)合，因為它們并不一定會在體內(nèi)發(fā)生相遇。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
材料與化工，291，求調(diào)劑
已經(jīng)有13人回復(fù)
-
PDF在線壓縮軟件
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
A區(qū)一本交叉課題組，低分調(diào)劑，招收機械電子信息通信等交叉方向
已經(jīng)有68人回復(fù)
-
接受26屆調(diào)劑生
已經(jīng)有21人回復(fù)
-
307求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
收調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
315食品工程求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
研究生招生
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
0817一志愿蘇州大學(xué)280復(fù)試調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
求調(diào)劑 一志愿蘇州大學(xué)，0856化工323分 | 本科應(yīng)化 | 有專利/競賽/科研助手經(jīng)歷 |
已經(jīng)有9人回復(fù)
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 承接實驗外包 的主題更新
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考博] 找博導(dǎo) +4 | 小呆呆熊 2026-03-07 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 085701環(huán)境工程295求調(diào)劑，一志愿A區(qū)211 +8 | 等春來， 2026-03-06 | 9/450 |
|
|
[考研] 化工284求調(diào)劑 +12 | 小黑想變白 2026-03-07 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 新疆大學(xué)地質(zhì)與礦業(yè)工程學(xué)院招生 +24 | another12 2026-03-04 | 32/1600 |
|
|
|
[考研] 材料工程085601調(diào)劑求老師收留 +5 | 強木木木 2026-03-07 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿南大化學(xué)339分求調(diào)劑，四六級已過，有比賽，有文章 +7 | Gallantzhou 2026-03-07 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑，一志愿山東大學(xué)材料與化工，328分，政治51 +5 | 關(guān)你西紅柿929 2026-03-08 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +4 | 是Lupa啊 2026-03-08 | 6/300 |
|
|
|
[考博] 申博 +5 | 添菜了哈 2026-03-04 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 0856求調(diào)劑 +3 | squirtle11 2026-03-07 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 288求調(diào)劑 +5 | 好好- 2026-03-07 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 招調(diào)劑 +20 | 帆船哥 2026-03-04 | 23/1150 |
|
|
|
[考研] 301求調(diào)劑 +5 | 一二LV 2026-03-07 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 276求調(diào)劑 本科天津工業(yè)大學(xué) 一志愿北京化工大學(xué)0855 +4 | 路lyh123 2026-03-06 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑 +6 | vuzhdkfjkx 2026-03-04 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料調(diào)劑 +5 | ws 上岸鴨 2026-03-05 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料085600 303求調(diào)劑 +7 | 1bygone 2026-03-04 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +4 | 小賽不吃香菜 2026-03-04 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 293求調(diào)劑 +4 | 是樂渝哇 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑一志愿中海洋 +3 | lour. 2026-03-03 | 3/150 |
|