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[求助]
提取腫瘤組織消化后得到的腫瘤細(xì)胞死亡率過高
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Balb/c小鼠的4T1腫瘤。取出移植瘤，浸入1640溶液中，使用手術(shù)刀/眼科剪將腫瘤組織盡可能剪碎。加入配置了Ⅰ型膠原酶（1mg/ml）和DNase（0.01mg/ml）的HBSS溶液于37攝氏度恒溫?fù)u床消化60分鐘。使用200目濾網(wǎng)過濾并用注射器研磨（每個腫瘤3分鐘）得到單細(xì)胞懸液。裂紅并計數(shù)（用時60min）進(jìn)行后續(xù)的染色。 目前發(fā)現(xiàn)染了死后之后上流式，死細(xì)胞很多。目前我懷疑：1.研磨+計數(shù)共用了2h，這個時間太久導(dǎo)致細(xì)胞死亡；2.消化太久導(dǎo)致細(xì)胞死亡。有沒有解決過類似情況的同學(xué)幫忙解答問題在哪兒 |
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