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糖霜果子新蟲 (初入文壇)
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[求助]
overlap PCR求助
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我想把A,B兩個(gè)基因通過overlap pcr方法連在一起，A引物是F1/R1，B引物是F2/R2，且兩片段之間有33 bp的同源臂。AB都擴(kuò)增出來回收，現(xiàn)在用overlap PCR出現(xiàn)了非特異型擴(kuò)增，一開始先不加引物，其他正常加，進(jìn)行18個(gè)循環(huán)，退火溫度55℃，待溫度下降，再加上引物進(jìn)行33個(gè)循環(huán)。primer用的還是原來的，一個(gè)片段的上游引物，一個(gè)片段的下游引物，延伸時(shí)間增加了一倍，有許多非特異條帶，還有比目的條帶還要大的，有大佬指點(diǎn)一下嘛，各位有好一點(diǎn)的建議？不勝感激，謝謝。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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