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科研顧問_Gu新蟲 (小有名氣)
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[交流]
干貨分享 | 小編親身經驗講解移液器使用方法（最詳細版）
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小編十年前也是在實驗室摸爬滾打的一名實驗員，昨天下午去實驗室做了一次Q-PCR實驗，自信心滿滿，認為這是一件小case。 今天早晨，處理實驗數據發(fā)現(xiàn)，擴增曲線沒有跑出來，和同事的數據一比對，小編完敗。 小編回想昨天實驗過程，開始進行問題分析，是移液槍使用不規(guī)范導致液體量取不準確？還是反應體系有問題？還是擴增溫度不夠？擴增時間不夠？。。。 今天借著Q-PCR實驗和小編的親身經驗，和大家分享下移液槍的正確使用，盡量避免實驗誤差。 一、首先了解移液槍的結構及使用前檢查 移液槍在使用前，應進行使用前檢查： 檢查刻度是否在最大值；旋轉旋鈕，檢查讀數是否準確；外觀是否干凈；按動按鈕檢查是否順暢或者有噪音；校對調整移液槍；使分配的體積在一定的規(guī)格范圍內。 二、量程調節(jié) 從大體積到小體積，按照正常的調節(jié)方法，逆時針旋轉旋鈕即可；從小體積到大體積，則先順時針旋轉刻度旋鈕至超過量程的刻度（繼續(xù)旋轉活塞按鈕約1/3圈），再回調至設定體積，這樣可以保證量取的最高精確度。 在該過程中，千萬不要將按鈕旋出量程，否則會卡住內部機械裝置而損壞了移液槍。 三、槍頭裝配 在將槍頭套上移液槍時，很多人會使勁地在槍頭盒子上敲幾下，這時錯誤的做法，因為這樣會導致移液槍的內部配件(如彈簧)因敲擊產生的瞬時撞擊力而變得松散，甚至會導致刻度調節(jié)旋鈕卡住。正確的方法是將移液槍(器)垂直插入槍頭中，稍微用力左右微微轉動1/4或1/2圈即可使其緊密結合。 四、預洗槍頭 在我們安裝了新的槍頭或增加了容量值以后，應該把需要轉移的液體（非粘稠液體）吸取、排放兩到三次，這樣做是為了讓槍頭內壁形成一道同質液膜，確保移液工作的精度和準度。（粘稠類液體可以選用電動分液槍，調低吸液速度，保證移液的準確性。 除了普通液體預洗以外，在吸取有機溶劑或高揮發(fā)性液體時，揮發(fā)性氣體會在白套筒室內形成負壓，從而產生漏液的情況，這時就需要預洗4~6次，讓白套筒室內的氣體達到飽和，負壓就會自動消失。 注：高溫或者低溫（冰點以下）液體請不要預洗！可以考慮活塞外置式移液器。 五、移液的方法 移液之前，要保證移液器、槍頭和液體處于相同溫度。吸取液體時，移液器保持豎直狀態(tài)，將槍頭插入液面下2-3毫米。在吸液之前，可以先吸放幾次液體以潤濕吸液嘴(尤其是要吸取粘稠或密度與水不同的液體時)。這時可以采取兩種移液方法。 一是前進移液法。用大拇指將按鈕按下至第一停點，然后慢慢松開按鈕回原點。接著將按鈕按至第一停點排出液體，稍停片刻繼續(xù)按按鈕至第二停點吹出殘余的液體。最后松開按鈕。 二是反向移液法。此法一般用于轉移高粘液體、生物活性液體、易起泡液體或極微量的液體，其原理就是先吸入多于設置量程的液體，轉移液體的時候不用吹出殘余的液體。先按下按鈕至第二停點，慢慢松開按鈕至原點。接著將按鈕按至第一停點排出設置好量程的液體，繼續(xù)保持按住按鈕位于第一停點(千萬別再往下按)，取下有殘留液體的槍頭，棄之。 六、移液器的正確放置 使用完畢，可以將其豎直掛在移液槍架上，但要小心別掉下來。當移液器槍頭里有液體時，切勿將移液器水平放置或倒置，以免液體倒流腐蝕活塞彈簧。 |
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