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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 核酸提取 » RNA提取方法
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fengaiqin銅蟲 (小有名氣)
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[交流]
RNA提取方法
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本操作流程適用于植物、藻類組織的總RNA提取，為文庫制備提供高質(zhì)量的RNA 1.分裝1.5mL 2%CTAB裂解液到2.0mL EP管上，加入2%β-巰基乙醇，65℃預熱。 2 用液氮預冷研缽，組織樣品放入加有液氮的研缽中，在液氮下把組織樣品充分研磨成粉末。把樣品粉末轉入到裝有裂解液的EP管中，（每mL裂解液可加30mg組織樣品）。 3 65℃、400-1400rpm孵育15min，室溫冷卻。4℃、12,000×g離心5min。 4 吸取上清液至2.0mL EP管中，每mL裂解液加入200μL氯仿/異戊醇（24:1），震蕩混勻。 5 4℃、12,000×g離心10min。 6 吸取上清液至2.0mL EP管中，加入等上清體積 酚/氯仿/異戊醇（25:24:1），震蕩混勻。 7 4℃、12,000×g離心10min。 8 吸取上清液至新的2.0mL EP管中，加入等上清體積 氯仿/異戊醇（24:1），震蕩混勻。 9 4℃、12,000×g離心10min。 10 吸取上清液至新的1.5mL離心管，注意不要吸到中間蛋白層，加入2/3上清液體積的異丙醇，輕輕顛倒混勻。 11 放入-20℃冰箱沉淀2h以上。 12 4℃、17,500×g離心20min。棄上清，加入1mL 75%乙醇，用移液器吹洗沉淀。 13 4℃、17,500×g離心3min，棄上清，短暫離心后吸去殘留液體，晾干3-5min。 14 用20-200μL DEPC水或者 RNase-free水溶解沉淀。 |
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