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全譜分析——探究小分子化合物的“大工具”
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樣品中如此微小的小分子化合物，究竟是如何進行分析的？ 代謝物全譜分析，通過色譜串聯(lián)質(zhì)譜（HPLC-MS/MS）技術(shù)鑒定樣品中小分子化合物，從而達到對其進行定性定量分析的目的。利用超高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對物質(zhì)分離和鑒定，結(jié)合質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫信息注釋和分類，精準(zhǔn)定性，幫助我們從整體上了解樣本的性質(zhì)，詳細的描述樣本中的物質(zhì)組成和含量等信息。 01 檢測平臺 02 技術(shù)流程 ①樣品采集→②代謝物提取→③樣本預(yù)處理→④樣本檢測→⑤軟件定性定量 03 代謝物定性定量方法 （1）定性分析軟件 使用Compound Discoverer 3.3 進行保留時間矯正、峰識別、峰提取等工作，根據(jù)二級質(zhì)譜信息利用Compound Discoverer分析質(zhì)譜原始數(shù)據(jù),匹配Thermo mzCloud,、Thermo mzValut、ChemSpider等數(shù)據(jù)庫，獲得代謝物定性及定量數(shù)據(jù)。 （2）代謝物定量計算方法 A.相對濃度：根據(jù)各樣品中代謝物峰面積，計算代謝物在樣品中相對濃度。計算公式：各物質(zhì)相對濃度=內(nèi)標(biāo)濃度/內(nèi)標(biāo)峰面積*代謝物峰面積/樣品取樣量，單位：μg/mL。 B.相對百分比：根據(jù)各樣品中代謝物峰面積，計算代謝物在樣品中相對百分比。計算公式：各物質(zhì)相對百分比=鑒定代謝物峰面積/代謝物總的峰面積*100%，單位：%。 04 技術(shù)特點 1. 較高的靈敏度、分辨率； 2. 較寬的動態(tài)范圍； 3. 適合于生物樣本中復(fù)雜代謝產(chǎn)物的檢測和潛在標(biāo)志物的鑒定。 05 應(yīng)用方向 1. 表型和生理功能研究； 2. 中醫(yī)理論研究； 3. 疾病病理研究； 4. 食品科學(xué)與營養(yǎng)學(xué)研究； 5. 臨床診斷及治療； 6. 畜牧與農(nóng)林業(yè)研究； 7. 藥物研究； 8. 環(huán)境毒理研究。 06 送樣要求 1. 血清、血漿：100ul/sample;-80℃保存，干冰寄送;若發(fā)生溶血，建議重新采樣。 2. 尿液：1 mL /sample;-80℃保存，干冰寄送。 3. 組織：200mg/sample;-80℃保存，干冰寄送。 4. 細胞：≥1×10/sample;-80℃保存，干冰寄送。 5. 腦脊液：400 ul /sample;-80℃保存，干冰寄送。 6. 糞便及腸道內(nèi)容物：200mg/sample;-80℃保存，干冰寄送。 7. 植物樣本：鮮樣≥3g/sample，干樣≥1g/sample。 8. 微生物樣本：≥1×10/sample;-80℃保存。 9. 注：避免反復(fù)凍融 |
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