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PCR電泳無條帶原因
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可能的原因及對應(yīng)的解決方案如下： 酶失活或在反應(yīng)體系中未加入酶。Taq DNA 聚合酶因保存或運(yùn)輸不當(dāng)而失活，往往通過更換新酶或用另一來源的酶以獲得滿意的結(jié)果。 模板含有雜質(zhì)。特別是對甲醛固定及石蠟包埋的組織常含甲酸，造成 DNA 脫嘌呤而影響 PCR 的結(jié)果。 變性溫度是否準(zhǔn)確：PCR 儀指示溫度與實際溫度是否相符，過高酶在前幾個循環(huán)就迅速失活；過低則模板變性不徹底。 反應(yīng)系統(tǒng)中污染了蛋白酶及核酸酶，應(yīng)在未加 Taq 酶以前，將反應(yīng)體系 95℃ 加熱 5~10 分鐘。 引物變質(zhì)失效。人工合成的引物是否正確。是否純化，或因儲存條件不當(dāng)而失活。 引物錯誤。利用 BLAST 檢查引物特異性或重新設(shè)計引物。 DNA 凝膠電泳時加入陽性對照，確保不是 DNA 凝膠和 PCR 程序的問題。 畢合生物（www.bihebio.com)提供服務(wù)內(nèi)容：分子生物學(xué)、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學(xué)、材料化學(xué)、細(xì)胞資源庫與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學(xué)、天然產(chǎn)物 |
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