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典型case分享 | 基于質(zhì)譜的蛋白質(zhì)O-糖基化分析
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生物體內(nèi)的糖基化修飾越來越受到關(guān)注，糖基化修飾主要分為n糖和o糖。對于哺乳動物而言，常見的o糖以連接在絲氨酸或蘇氨酸的n-乙酰半乳糖胺（galnac）為基礎(chǔ)，在酶的作用下進(jìn)一步轉(zhuǎn)移半乳糖或n-乙酰葡萄糖胺等糖基，從而形成四種核心結(jié)構(gòu)。在這四種核心結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上，已合成的糖苷還可以在酶的作用下進(jìn)一步轉(zhuǎn)移巖藻糖、唾液酸等糖基，從而形成更復(fù)雜的o糖。 含有o-galnac的糖蛋白在傳統(tǒng)上被定義為粘蛋白或粘蛋白樣蛋白。粘蛋白攜帶密集的o-galnac糖簇，親水且?guī)ж?fù)電的o-聚糖易形成具有潤滑作用的高度水合致密陣列，并作為抵御病原體和物理或化學(xué)損傷的保護(hù)屏障，因而常在呼吸道等各種器官的粘膜上表達(dá)。而最近，o-galnac被發(fā)現(xiàn)廣泛分布在許多不具有粘蛋白樣特質(zhì)的蛋白質(zhì)上。這些o糖在細(xì)胞中具有特殊功能，包括激素調(diào)節(jié)、脂質(zhì)代謝和生長因子、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等。部分研究者對果蠅的多肽α-n乙酰半乳糖胺轉(zhuǎn)移酶基因進(jìn)行rna干擾，發(fā)現(xiàn)果蠅特定的形態(tài)和功能效應(yīng)受到影響，說明了發(fā)育過程中位點(diǎn)特異性o-糖基化的重要性。 隨著質(zhì)譜表征技術(shù)的更新?lián)Q代，對各類生物體內(nèi)的蛋白組和重組蛋白藥物研究逐漸深入，許多非常規(guī)o糖修飾也得到了多角度的確證。例如當(dāng)下表達(dá)抗體最常使用的cho細(xì)胞，其表達(dá)的重組人igg1輕鏈上的o-巖藻糖修飾，重組人igg2輕鏈上的o-甘露糖修飾等陸續(xù)被發(fā)現(xiàn)。針對這些非常規(guī)o糖對藥物安全性和有效性的研究還在進(jìn)行中，未來也可能會有更多非常規(guī)o糖修飾被揭曉。 與蛋白質(zhì)的合成不同，o糖合成過程沒有固定的模板遵循，o糖缺乏n糖的基序（nxs/t），因此在位點(diǎn)和糖鏈結(jié)構(gòu)兩個(gè)層面常具有較強(qiáng)的異質(zhì)性。而隨著對o糖生物學(xué)功能認(rèn)識的深入，對o糖的深度表征也越來越得到生物制藥從業(yè)者的關(guān)注。斯坦德生物醫(yī)藥大分子實(shí)驗(yàn)室選用s-bio公司的ezglyco® o糖制備試劑盒，以最小化非特異性o糖β消除反應(yīng)。通過糖捕集珠除去蛋白和其他雜質(zhì)，以便后續(xù)標(biāo)記。熒光試劑標(biāo)記后的o糖經(jīng)除鹽處理后即可上機(jī)分析。借助高效液相系統(tǒng)和高靈敏度的質(zhì)譜儀，我們能在較短的實(shí)驗(yàn)周期內(nèi)對標(biāo)記后的o糖進(jìn)行高置信度的確認(rèn)。歡迎業(yè)內(nèi)新老客戶垂詢！ 參考文獻(xiàn) [1]joanne chia, germaine goh, frederic bard. short o-galnac glycans: regulation and role in tumor development and clinical perspectives. [2]barry d shur, michael a ensslin, carey rodeheffer. sed1 function during mammalian sperm-egg adhesion. [3]katrine t.-b.g. schjoldager, henrik clausen. site-specific protein o-glycosylation modulates proprotein processing —deciphering specific functions of the large polypeptide galnac-transferase gene family. [4]liping zhang, kelly g. ten hagen. dissecting the biological role of mucin-type o-glycosylation using rna interference in drosophila cell culture. [5]john f valliere-douglass, lowell j brady, chris farnsworth, et al. o-fucosylation of an antibody light chain: characterization of a modification occurring on an igg1 molecule. [6]theresa martinez, danielle pace, lowell brady. characterization of a novel modification on igg2 light chain evidence for the presence of o-linked mannosylation. [ Last edited by 斯坦德檢測集團(tuán) on 2024-5-9 at 11:36 ] |
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