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基礎(chǔ)生物實(shí)驗(yàn)外?/a>新蟲(chóng) (初入文壇)
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干貨分享 | 試驗(yàn)動(dòng)物的采血方法
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一、大、小鼠割（剪）尾采血 當(dāng)取血量較少時(shí)采用本法。采血前將鼠尾部浸在50℃左右溫水中數(shù)分鐘或用大功率燈泡照射數(shù)分鐘，麻醉動(dòng)物，使尾部血管充盈。用75%酒精擦拭鼠尾，用鋒利的刀片在尾部作一橫切口，割破尾靜脈或動(dòng)脈，讓血液自由滴入盛器或用毛細(xì)吸管吸取，采血結(jié)束，傷口消毒并壓迫止血。若多次取血，最好從鼠尾末端開(kāi)始。小鼠每次可取血0.1ml左右，大鼠每次可取血0.3～0.5ml。若只需要幾微升血量，可用銳器（刀或剪刀）垂直割去尾尖1-2 mm，用毛細(xì)吸管吸取血液。使用肝素處理過(guò)的毛細(xì)吸管，或?qū)⑿∈笪膊糠湃敫嗡靥幚磉^(guò)的離心管內(nèi)，可增加取血量。該方法可反復(fù)多次使用。安全可行的取血量和取血頻率取決于鼠的總血量（50-70ml/kg），一般來(lái)說(shuō)，每2-4周可取10%的循環(huán)血量，每24h可取1%的循環(huán)血量（參考《Manipulating the Mouse Embryo-A Laboratory manual 4th edition》P230）。 二、眼眶靜脈叢（竇）取血 將動(dòng)物麻醉后，取側(cè)臥位放在一平面上，用食指和拇指壓迫頸部?jī)啥耸诡^部靜脈血液回流困難，眼球突出。通常用硬質(zhì)毛細(xì)玻璃管或巴斯德玻璃吸管，與鼠面部呈45°夾角，由眼內(nèi)角刺入眼瞼和眼球之間，向眼底部方向移動(dòng)，稍加旋轉(zhuǎn)以切開(kāi)靜脈叢。一般刺入深度為小鼠約2～3mm、大鼠約4～5mm，刺入出血后，將取血管邊推邊抽。取到所需的血量后，即除去加于頸部的壓力，同時(shí)將采血器拔出。為防止術(shù)后穿刺孔出血，用消毒紗布?jí)浩妊矍?0秒。若手法得當(dāng)，體重20～30g的小鼠每次可采血0.2～0.3ml，體重200～300g的大鼠每次可采血0.4～0.6ml。 三、摘眼球取血法 本法多用于小鼠，所采血液為眶動(dòng)脈和眶靜脈的混合血，一般可采集小鼠體重4%～5%的血量。操作前應(yīng)深度麻醉小鼠，將小鼠側(cè)臥位置于平面上，用食指和拇指壓迫眼周皮膚，是眼球突出充血，用眼科鑷迅速夾去眼球，并將鼠倒置，頭向下，可適當(dāng)從身體后側(cè)向眼部按摩小鼠軀體，使眼眶內(nèi)血液流入事先準(zhǔn)備好的收集管。此法只能一次采血，如需反復(fù)多次采血樣時(shí)，則不能采用這種方法。 四、大（�。┦笮呐K采血 大（�。┦舐樽砗�，仰臥位固定，剪去胸前區(qū)被毛，皮膚消毒后，用左手食指在左側(cè)第3-4肋間觸摸到心搏處，右手持帶有4-5號(hào)針頭的注射器，選擇心搏最強(qiáng)處垂直向下穿刺，當(dāng)刺中心臟時(shí)，血液會(huì)自動(dòng)進(jìn)入注射器。每次采血量0.5-0.6mL。除此之外，也可側(cè)臥位穿刺或仰臥位沿胸骨水平縱向進(jìn)針。心臟采血注意要點(diǎn)： ①要迅速而直接插入心臟，否則，心臟將從針尖移開(kāi)； ②如第一次沒(méi)刺準(zhǔn)，將枕頭抽出重刺，不要在心臟周?chē)鷣y探，以免損傷心、肺； ③要緩慢而穩(wěn)定地抽吸，否則太多的真空反而使心臟塌陷。若血流阻斷，可輕輕旋轉(zhuǎn)針頭或稍微抽出針頭。若不需保留動(dòng)物存活時(shí)，也可麻醉后切開(kāi)動(dòng)物胸部，將注射器直接刺入心臟抽吸血液。操作時(shí)，先將動(dòng)物深度麻醉，然后將其固定在鼠板上，剖開(kāi)胸腔，然后將注射器針頭刺入右心室后立即抽血。開(kāi)胸時(shí)，要盡可能減少出血。 五、大血管采血 大、小鼠可從股動(dòng)（靜）脈、腋下動(dòng)（靜）脈、頸動(dòng)（靜）脈或腹主動(dòng)脈采血。在這些部位采血需麻醉后固定動(dòng)物，然后做動(dòng)（靜）脈分離手術(shù)，使其暴露清楚后，用注射器沿大血管平行方向刺入，抽取所需血量。 六、兔耳緣靜脈采血 多用于家兔等動(dòng)物的中量采血，可反復(fù)采取。操作時(shí)，將兔固定于兔盒內(nèi)或由助手固定，選靜脈較粗、清晰的耳朵，拔去采血部位的被毛，消毒。為使血管擴(kuò)張，可用手指輕彈或用二甲苯涂擦血管局部（進(jìn)行血細(xì)胞計(jì)數(shù)則不宜用二甲苯）。用6號(hào)針頭沿耳緣靜脈遠(yuǎn)心端刺入血管。若所需血液較少，可用鋒利刀片在血管上作一切口或用針頭刺破血管即可。取血后，用棉球壓迫止血。兔用此法一次可采血5～10ml。 七、兔耳中央動(dòng)脈采血 固定兔后，一手固定兔耳，一手持注射器，在中央動(dòng)脈末端，沿動(dòng)脈平行的方向刺入動(dòng)脈，刺入方向應(yīng)朝向近心端。一般用6號(hào)針頭采血。取血完畢后注意止血。此法一次可取血10～15ml。注意：兔的習(xí)性膽小易驚，其外周血液循環(huán)對(duì)外界環(huán)境刺激極為敏感，耳中央動(dòng)脈易發(fā)生痙攣性收縮。因此，抽血前必須讓兔耳充血，并趕在動(dòng)脈擴(kuò)張，而未發(fā)生痙攣性收縮前立即抽血。若注射針刺入后尚未抽血，血管已發(fā)生痙攣性收縮，應(yīng)將針頭放在血管內(nèi)固定不動(dòng)，待痙攣消失血管舒張后再抽。若在血管痙攣時(shí)強(qiáng)行抽吸，會(huì)導(dǎo)致管壁變形，針頭易刺破管壁形成血腫。 八、兔心臟采血 將兔麻醉后，仰臥固定。在左側(cè)胸部心臟部位去毛，消毒。用左手觸摸左側(cè)第3～4肋間，選擇心搏處穿刺（胸骨左緣外3mm處），進(jìn)針后針頭偏向胸骨，與水平面呈45°夾角，或沿劍突尾端緣和腹面平面呈30°角向頭端刺入。抽出所需血量后，應(yīng)迅速拔針，用手指緊壓術(shù)部并消毒。一次取血不超過(guò)20～25ml。注意：采血?jiǎng)幼饕搜杆伲钥s短在心臟內(nèi)的留針時(shí)間和防止血液凝固或溶血，采血一般可選擇8號(hào)針頭，采血中回血不好或動(dòng)物躁動(dòng)時(shí)應(yīng)拔出注射器，重新確認(rèn)后再次穿刺采血。一般經(jīng)6～7天，可重復(fù)進(jìn)行心臟采血。 九、背跖靜脈采血 背跖靜脈采血主要用于豚鼠。背跖靜脈有兩根：外側(cè)跖靜脈和內(nèi)側(cè)跖靜脈，均可用于采血。操作時(shí)，由助手固定動(dòng)物，并將其后肢膝關(guān)節(jié)伸直到操作者面前，操作者將動(dòng)物腳面用酒精消毒，并找出外側(cè)或內(nèi)側(cè)跖靜脈后，以左手的拇指和食指拉住豚鼠的趾端，右手拿注射器刺入靜脈采血。拔針后立即出血，并可見(jiàn)刺入部位呈半球隆起，應(yīng)用紗布或脫脂棉壓迫止血。反復(fù)取血時(shí)，兩后肢交替使用。 十、犬前、后肢皮下淺層靜脈采血 此法在犬使用最廣泛。前后肢皮下千層靜脈主要包括：前肢內(nèi)側(cè)皮下頭靜脈、后肢外側(cè)小隱靜脈。將動(dòng)物側(cè)臥固定，減去采血部位的被毛，用碘酒、酒精消毒皮膚，用膠皮帶扎緊或用手抓緊靜脈近心端，使血管擴(kuò)張，使用6號(hào)或7號(hào)針頭的注射器從靜脈遠(yuǎn)心端水平刺入血管，抽取時(shí)速度要稍慢，以防抽癟血管。當(dāng)針頭插入血管后，應(yīng)解除靜脈上端加壓的手或膠皮管。取血完畢后，應(yīng)注意止血。如只需較少血量，可直接用針尖穿刺，再用玻片接住或用滴管吸取。 十一、犬頸靜脈采血 從外周靜脈小的犬采大量血時(shí)最好選擇頸靜脈。通常一人固定犬，另一人采集血樣。將動(dòng)物側(cè)臥固定，使頸伸直并稍向一側(cè)歪。減去頸部被毛，消毒。對(duì)頸基部施加壓力可阻止靜脈回流，即可看見(jiàn)血管。用連有7號(hào)針頭的注射器，針頭平行血管向頭部刺入血管。由于此靜脈在皮下易于滑動(dòng)，針刺時(shí)除用左手固定好血管外，刺入要準(zhǔn)確。取血后注意壓迫止血。本法一次可采集較多血。 十二、犬心臟采血 將動(dòng)物麻醉后，仰臥固定，前肢向背側(cè)方向固定，暴露胸部，剪去左側(cè)第3~5肋間的被毛，消毒。用左手探摸，確定搏動(dòng)最強(qiáng)處。右手持連有7號(hào)針頭的注射器。一般選擇胸骨左外緣1cm處，于第3~4肋間穿刺。穿刺時(shí)，可隨針頭接觸到心臟跳動(dòng)的感覺(jué)，調(diào)整刺入方向和深度，但不能讓針頭在胸腔內(nèi)亂晃。當(dāng)穿刺正確時(shí)，血液自動(dòng)流入注射器。本法可抽取大量血液。 十三、豬耳大靜脈 當(dāng)需中量或少量血時(shí)采用。將動(dòng)物固定后，用酒精、碘酒消毒。用力擦拭豬耳，可清晰見(jiàn)到耳緣靜脈，用連有6號(hào)針頭的注射器直接抽取。注意抽吸速度不要太快，因豬耳皮膚較厚，應(yīng)選擇銳利的針頭。另外，可用刀片切開(kāi)靜脈，用滴管等物吸取。取血后注意壓迫止血。 十四、豬心臟采血 基本方法同嚙齒類動(dòng)物的心臟采血。因豬的胸部肌肉較厚，應(yīng)使用心臟穿刺針。仰臥固定，剃毛，消毒。左手探摸，在左3～4肋間處，右手持連有心臟穿刺針的注射器。如第一次沒(méi)有成功，則拔出后重新穿刺。完畢后壓迫止血。本法可采集大量血液。 |
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