 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 2 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 821 | 回復: 1 | |||
[交流]
干貨分享 | 免疫熒光染色，零失誤封片技巧 已有1人參與
|
|
免疫熒光染色是實驗室常用的技術之一，但在操作過程中，有許多需要注意的細節(jié)，任何一個環(huán)節(jié)的失誤都可能導致實驗失敗。本文將為您介紹免疫熒光染色的注意事項，并附上零失誤封片技巧。 1. 抗體選擇：選擇針對您研究的目標蛋白特異性高、親和力強的抗體，一抗的濃度需要預實驗摸索。一抗?jié)舛冗^高(本身熒光實驗，一抗的濃度就較高)，也是造成自發(fā)熒光強的重要原因。 2. 抗體稀釋：根據(jù)抗體說明書建議，使用合適的稀釋液和稀釋比例進行抗體稀釋。 3. Blocking：使用合適的Blocking 液進行Blocking 處理，以減少非特異性結合，一般采用動物血清，在室溫下封閉1h左右。建議適當延長封閉的時間至2h。如果室溫較低，可以考慮采用37℃孵育箱進行封閉，優(yōu)化封閉時間，充分去除組織中的類屬抗原。 4. 二抗選擇：選擇與一抗種屬匹配的熒光標記二抗，二抗在4℃長時間放置后可能有部分熒光素沉淀，導致染色結果有星星點點的雜質(zhì)，損失珍貴樣本！建議配成工作液后，高速離心，取上清使用。 5. 洗滌：在每一步操作后，充分洗滌以去除未結合的抗體和染料。 6. 封片：選擇合適的封片劑進行封片，避免熒光淬滅。 7. 對照設置：設置合適的陽性和陰性對照，以確保實驗結果的可靠性。 零失誤封片技巧： 在滴加封片劑之前，確保切片上沒有多余的液體。封片劑也不宜添加過多，可用10ul槍頭吸取少量，點在每個樣品邊緣，緩慢蓋片。 滴加適量的封片劑，避免產(chǎn)生氣泡。用10ul槍頭滴加~5ul/樣品（根據(jù)組化筆大小 酌情更改封片劑滴加量） 千萬不可打出氣泡！不要把槍頭最后一滴封片劑打出！氣泡會嚴重影響封片效果！如果不小心產(chǎn)生氣泡 → 可以用鑷子輕輕將氣泡擠出。 使用干凈的蓋玻片，輕輕按壓，使封片劑均勻覆蓋切片。 避免在蓋玻片上留下指紋或污漬。? ? 以上就是免疫熒光染色的注意事項及零失誤封片技巧。希望 這些技巧能幫助您順利完成實驗。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
回復此樓» 猜你喜歡
為啥又有個山西的兄弟在這里招搖呀不累么？
已經(jīng)有13人回復
-
尋求能在電腦上支持回放各地電視節(jié)目的軟件
已經(jīng)有0人回復
-
急重癥醫(yī)學/創(chuàng)傷/燒傷/整形論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有81人回復
-
殼聚糖紫外吸收標曲可以做嗎？
已經(jīng)有0人回復
-
納米顆粒離心無法完全沉淀
已經(jīng)有0人回復
-
博士后面上項目申請書生成后，最后的簽字頁在哪里提交？
已經(jīng)有5人回復
-
歐洲博后是否有招1年的？
已經(jīng)有5人回復
-
Phytomedicine的作者同意聲明
已經(jīng)有0人回復
-
求調(diào)劑！306臨床醫(yī)學考生 305，英語一47
已經(jīng)有0人回復
-
表哥與省會女結婚，父母去幫帶孩子被省會女氣回家生重病了
已經(jīng)有14人回復
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
2樓2024-04-15 15:10:08
相關版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 醫(yī)學驗證123 的主題更新
| 2 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 293求調(diào)劑 +4 | 是樂渝哇 2026-03-03 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 環(huán)境工程學碩288求助調(diào)劑 +7 | 多吃億口芝士 2026-03-02 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 264求調(diào)劑 +6 | 26調(diào)劑 2026-03-03 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工調(diào)劑 280分 +10 | yyqqhh 2026-03-03 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 292求調(diào)劑 +3 | sgbl 2026-03-03 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑 +9 | 鹿沫笙 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 0805總分292，求調(diào)劑 +12 | 幻想之殤 2026-03-01 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +5 | kkcoco25 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 中國科學技術大學材料與化工281求調(diào)劑，有科研和獲獎經(jīng)歷 +6 | wsxw 2026-03-02 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +3 | MuoLuo1312 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 課題組接收材料類調(diào)劑研究生 +6 | gaoxiaoniuma 2026-02-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑材料學碩 +4 | 詞凝Y 2026-03-02 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0854復試調(diào)劑 276 +5 | wmm9 2026-03-01 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0856調(diào)劑 +10 | 劉夢微 2026-02-28 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +11 | yunziaaaaa 2026-03-01 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 一志愿華南理工大學材料與化工326分，求調(diào)劑 +3 | wujinrui1 2026-02-28 | 3/150 |
|
|
|
[考博] 誠招農(nóng)業(yè)博士 +3 | 心欣向榮 2026-02-28 | 3/150 |
|
|
|
[基金申請] 此成果不能導入原因：元數(shù)據(jù)必填信息不完整，可 進行補充。 +4 | Kittylucky 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +6 | 曼殊2266 2026-02-28 | 7/350 |
|
|
|
[高分子] 求環(huán)氧樹脂研發(fā)1名 +3 | 孫xc 2026-02-25 | 11/550 |
|