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科研戰(zhàn)神·王鐵蟲 (小有名氣)
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常見的BCA法檢測(cè)蛋白定量
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常見的BCA法檢測(cè)蛋白定量 在蛋白質(zhì)比色定量試驗(yàn)中，最常用的方法是二喹啉甲酸（Bicinchoninic acid，BCA）法蛋白定量。那么為什么我們要選擇用BCA法？BCA法是Lowry測(cè)定法的一種改進(jìn)方法，與Lowery法相比，BCA蛋白測(cè)定方法操作更簡(jiǎn)單，試劑及其形成的顏色復(fù)合物穩(wěn)定性更好，幾乎沒有干擾物質(zhì)的影響，靈敏度高（微量檢測(cè)可達(dá)到0.5μg/ml），應(yīng)用更加靈活。與Bradford法相比，BCA法的顯著優(yōu)點(diǎn)是不受去垢劑的影響。 BCA法蛋白定量的原理是什么？ 大多數(shù)蛋白樣品可通過比色測(cè)定法定量，在典型的蛋白測(cè)定中，化學(xué)試劑加入到蛋白樣品溶液里產(chǎn)生顏色變化，這一變化可由分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀檢測(cè)，并與已知濃度的蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線作比較。BCA法是在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)與Cu2+絡(luò)合并將Cu2+還原成Cu1+，BCA與Cu1+結(jié)合形成穩(wěn)定的紫藍(lán)色復(fù)合物，在562 nM處有高的光吸收值并與蛋白質(zhì)濃度成正比，據(jù)此可測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。 BCA法蛋白定量是如何操作的？ 1 先將solution A 搖晃混勻，根據(jù)樣品數(shù)量，按50體積solution A加1體積solution B試劑（50:1）配制成BCA工作液，充分混勻。BCA工作液在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。 2 稀釋標(biāo)準(zhǔn)品：蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品（5mg/ml BSA，-20℃保存）用生理鹽水或PBS稀釋成2000ug/ml，1000 ug/ml，500 ug/ml，250 ug/ml，125 ug/ml，62.5 ug/ml，31.25 ug/ml，15.625 ug/ml八個(gè)濃度的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液。（大家根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)品的濃度合理設(shè)計(jì)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的濃度） 3 樣本的制備：蛋白質(zhì)樣品用細(xì)胞總蛋白提取試劑提取總蛋白。 4 取步驟2中的20ul蛋白標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣品至96孔板中。 5 在各孔中加入200微升BCA工作液，這時(shí)使用加樣槍輕柔吹打，將其中液體混勻，這時(shí)請(qǐng)注意，盡量小一點(diǎn)力氣輕柔一點(diǎn)，不要弄出很多氣泡，這樣會(huì)影響讀數(shù)，然后再37℃室內(nèi)放置30-60min。將液體冷卻至室溫，在酶標(biāo)儀上測(cè)定562nm（或540-590nm之間）的波長(zhǎng)的吸光值，最后可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出蛋白質(zhì)的濃度，為樣品蛋白質(zhì)定量。 MDL進(jìn)行的BCA法蛋白定量的實(shí)驗(yàn)視頻 濃度計(jì)算步驟 1 輸入相對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線值和相應(yīng)的蛋白樣品值，一般是8個(gè)點(diǎn)。 2 然后將上面數(shù)據(jù)做圖表（XY 散點(diǎn)圖），點(diǎn)擊圖表里面的散點(diǎn)，右鍵添加趨勢(shì)曲線。 3 然后彈出設(shè)置趨勢(shì)線格式，點(diǎn)擊選勾最底下顯示公式（E）以及顯示R平方值。則在圖表標(biāo)題中顯示出公式和R2值來。一般 R2值越接近1代表你的標(biāo)準(zhǔn)曲線做得越好，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線帶入的樣品OD值測(cè)出的蛋白濃度也越準(zhǔn)確。R2值越接近1越好，一般要求為0.99幾左右。 4 將樣品OD值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線的公式中，即得到待測(cè)樣品蛋白的濃度。 |
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xhuama 2026-03-02 | 11/550 |
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[考研] 化學(xué) 0703求調(diào)劑 總分293 一志愿211 +7 | 土土小蟲 2026-03-03 | 7/350 |
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[考研] 學(xué)碩材料275調(diào)劑 +6 | 路三三 2026-03-03 | 6/300 |
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[考研] 085600 材料與化工 298 +10 | 小西笑嘻嘻 2026-03-03 | 10/500 |
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[考研] 291求調(diào)劑 +3 | 咕嚕咕嚕123123 2026-03-02 | 4/200 |
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[考研] 0854總分272 +5 | 打小就是老實(shí)人 2026-03-02 | 6/300 |
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[考研] 276求調(diào)劑 +8 | 路lyh123 2026-02-28 | 10/500 |
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[考研] 085600材料與化工 298 調(diào)劑 +3 | 小西笑嘻嘻 2026-03-03 | 3/150 |
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[考研] 材料學(xué)碩318求調(diào)劑 +15 | February_Feb 2026-03-01 | 17/850 |
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[考研] 材料學(xué)碩318求調(diào)劑 +11 | February_Feb 2026-03-01 | 11/550 |
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[考研] 調(diào)劑 +5 | 13853210211 2026-03-02 | 7/350 |
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[考研] 0854復(fù)試調(diào)劑 276 +5 | wmm9 2026-03-01 | 7/350 |
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[考研] 材料復(fù)試調(diào)劑 +5 | 學(xué)材料的點(diǎn) 2026-03-01 | 6/300 |
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[基金申請(qǐng)] 此成果不能導(dǎo)入原因：元數(shù)據(jù)必填信息不完整，可 進(jìn)行補(bǔ)充。 +4 | Kittylucky 2026-03-02 | 5/250 |
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[考研] 一志愿鄭大材料學(xué)碩298分，求調(diào)劑 +6 | wsl111 2026-03-01 | 6/300 |
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[考研] 調(diào)劑 +3 | 13853210211 2026-03-02 | 4/200 |
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[考研] 材料學(xué)調(diào)劑 +10 | 提神豆沙包 2026-02-28 | 12/600 |
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[基金申請(qǐng)]
本子寫完了，給DS兄弟看了，得了92分
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Doma 2026-03-01 | 7/350 |
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[考研] 295復(fù)試調(diào)劑 +3 | 簡(jiǎn)木ChuFront 2026-03-01 | 3/150 |
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[考研] 317一志愿華南理工電氣工程求調(diào)劑 +6 | Soliloquy_Q 2026-02-28 | 11/550 |
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