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科研戰(zhàn)神·王鐵蟲 (小有名氣)
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如何選擇細(xì)菌接種方法?
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如何選擇細(xì)菌接種方法? 細(xì)菌的接種方法有很多種,如劃線法、涂布法、傾注法、斜面接種法、液體培養(yǎng)基接種法、螺旋接種法等,其方法和應(yīng)用各有不同,小助手將一一解釋,以幫助實(shí)驗(yàn)人員選擇操作。 一、劃線法 用途:主要用于菌種分純,獲得單菌落。 實(shí)驗(yàn)步驟:由接種環(huán)沾取少許待分離的材料,在無菌平板表面進(jìn)行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續(xù)劃線(詳見圖1),微生物細(xì)胞數(shù)量將隨著劃線次數(shù)的增加而減少,并逐步分散開來,如果劃線適宜的話,微生物能一一分散,經(jīng)培養(yǎng)后,可在平板表面得到單菌落。 優(yōu)點(diǎn):可以觀察菌落特征,對混合菌進(jìn)行分離。 缺點(diǎn):不能用于菌落計(jì)數(shù)。 圖片 圖1 常見的5種劃線方法 二、涂布法 用途:主要用于菌落總數(shù)計(jì)數(shù)。 實(shí)驗(yàn)步驟:先將培養(yǎng)基熔化后趁熱倒入無菌平板中,然后用無菌吸管吸取0.1ml菌液接種在已凝固的瓊脂平板上。再用無菌玻璃棒將菌液在平板上涂抹均勻,將涂抹好的平板平放于桌上20~30min使菌液滲透入培養(yǎng)基內(nèi),然后將平板倒轉(zhuǎn),保溫培養(yǎng),至長出菌落后即可計(jì)數(shù)。 小助手最近將幽門螺旋桿菌進(jìn)行涂布,詳見下方視頻。 優(yōu)點(diǎn):可以計(jì)數(shù),可以觀察菌落特征。 缺點(diǎn):接種前需梯度稀釋,吸收量較少,較麻煩,平板不干燥效果不好,容易蔓延。 三、傾倒法 用途:主要用于菌落總數(shù)的計(jì)數(shù)。 實(shí)驗(yàn)步驟:吸取1ml菌液加入平板中,倒入已融化并冷卻至45~50℃的細(xì)菌培養(yǎng)基,輕輕轉(zhuǎn)動平使菌液與培養(yǎng)基混合均勻,冷凝后倒置,適溫培養(yǎng)。至長出菌落后即可計(jì)數(shù)。 優(yōu)點(diǎn):可以計(jì)數(shù),較方便。 缺點(diǎn):接種前需梯度稀釋,不能觀察菌落特征,不適用于嚴(yán)格好氧菌和熱敏感菌。 四、斜面接種法 用途:主要用于保存菌種,或觀察細(xì)菌的某些生化特性和動力。 實(shí)驗(yàn)步驟:用接種環(huán)或接種針伸入菌種管內(nèi),挑取用來移種的菌落。伸入斜面培養(yǎng)管內(nèi),先從斜面底部到頂端拖一條接種線,再自下而上蜿蜒劃線,或直接自下而上地蜿蜒劃線。接種完成之后,用火焰滅菌培養(yǎng)管口,并塞上棉塞,置于37℃培養(yǎng)(詳見圖2)。 圖片 圖2 斜面接種法 五、液體培養(yǎng)基接種法 用途:主要用于菌液比濁實(shí)驗(yàn)。 實(shí)驗(yàn)步驟:用滅菌接種環(huán)挑取菌落或標(biāo)本,在試管內(nèi)壁與液面交界處輕輕研磨,使細(xì)菌均勻得散落在液體培養(yǎng)基中。 六、螺旋接種法 用途:此法主要用于菌落總數(shù)計(jì)數(shù)。 Spiral plater 可以在無任何全部或中間稀釋的情況下快速細(xì)菌接種。對數(shù)減少的樣品容量以阿基米德螺旋線的形式被自動分注在旋轉(zhuǎn)式培養(yǎng)基表面。培養(yǎng)基上每一點(diǎn)的容量可以被知曉和校準(zhǔn)。菌液的濃度可以通過培養(yǎng)皿上一定區(qū)域的菌落數(shù)量除以同區(qū)域樣品分注量來計(jì)算。 優(yōu)點(diǎn):螺旋接種法菌液無需稀釋(其他接種方法均需經(jīng)過梯度稀釋才能計(jì)菌落數(shù)),自動化接種,效率高,可節(jié)省3/4的耗材和時(shí)間。 缺點(diǎn):產(chǎn)品成本高,適用于樣品量比較大的實(shí)驗(yàn)。 |
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