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科研戰(zhàn)神·王鐵蟲 (小有名氣)
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實(shí)驗(yàn)干貨 | 常用分子生物學(xué)技術(shù)原理
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實(shí)驗(yàn)干貨 | 常用分子生物學(xué)技術(shù)原理 1. 分子雜交與印跡技術(shù) （1）探針是經(jīng)過特殊標(biāo)記，能與待測單鏈核酸分子互補(bǔ)結(jié)合的已知核酸片段 （2）印跡是將電泳分離后的大分子轉(zhuǎn)印到硝酸纖維素膜上，以便雜交的技術(shù) （3）DNA印跡：Southern blotting，用于檢測基因組DNA （4）RNA印跡：Northern blotting，主要用來檢測mRNA的表達(dá)水平 （5）蛋白質(zhì)印跡：Western blotting，用于檢測蛋白質(zhì)的水平 2. PCR技術(shù) （1）反應(yīng)體系：單鏈DNA模板、特異性DNA引物、耐熱DNA聚合酶（Taq DNA聚合酶）、dNTPs底物、含Mg2+的緩沖液。 （2）反應(yīng)步驟：變性、復(fù)性、延伸 （3）逆轉(zhuǎn)錄PCR：即RT-PCR，在PCR之前先將單鏈mRNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。這是目前從RNA水平出發(fā)研究基因表達(dá)或獲得目的基因最有效的方法。 （4）應(yīng)用：目的基因的克隆、基因的體外突變、微量DNA或RNA擴(kuò)增、DNA序列測定、基因突變分析 3. 蛋白質(zhì)相互作用研究 酵母雙雜交技術(shù)、CoIP 4. DNA-蛋白質(zhì)相互作用 電泳遷移率變動(dòng)分析（EMSA）、染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)（ChIP） 5. 基因敲除 即gene knock-out，通過同源基因重組原理使得某個(gè)基因活性喪失，從而研究該基因功能的方法 |
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