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科研實(shí)驗(yàn)1新蟲 (初入文壇)
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動(dòng)物造模 動(dòng)物實(shí)驗(yàn) --牙周炎動(dòng)物模型構(gòu)建
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牙周炎(periodontitis)是一種常見的牙齒周圍組織即牙齦、牙槽骨、牙周膜和牙骨質(zhì)破壞的慢性感染性疾病，目前普遍認(rèn)為菌斑微生物及其產(chǎn)物在局部的堆積和浸潤是牙周炎發(fā)生、發(fā)展的關(guān)鍵因子。隨著醫(yī)學(xué)知識(shí)的普及和人們對(duì)口腔健康重視程度的加深，牙周炎作為一項(xiàng)發(fā)病率極高且影響廣泛的口腔疾病，其防治工作迫在眉睫。建立正確合理的動(dòng)物模型，有利于深入研究影響牙周炎發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵因素，為疾病的控制、藥物研發(fā)提供思路，從而開展積極有效的臨床防治工作。 動(dòng)物的選擇 一般選擇2~4月齡的SD大鼠和Wistar大鼠，后者性情更為溫順些。因大鼠繁殖率較高，飼養(yǎng)成本較低，有足夠的數(shù)量進(jìn)行研究和統(tǒng)計(jì)分析，又因其生命周期短，適應(yīng)能力及抗病能力強(qiáng)，可快速誘發(fā)疾病，是目前應(yīng)用最廣泛的動(dòng)物，尤其適用于測試各種藥劑緩解炎癥的功效。 但大鼠牙周病發(fā)病率遠(yuǎn)低于人，且牙齒小，對(duì)操作和觀察有一定影響，同時(shí)因大鼠的牙齒能持續(xù)不斷的生長，只適合短時(shí)程的實(shí)驗(yàn)研究。 造模方法 一結(jié)扎線法 目前單純利用該法構(gòu)建動(dòng)物牙周炎模型的技術(shù)已相當(dāng)成熟，在各種牙周病的研究中均得到廣泛使用。 造模方法： 選取SD大鼠，大鼠用10％水合氯醛麻醉，麻醉劑量0.2mL/100g，然后用尖頭探針將第二磨牙的牙齦分離，用縫線在齦溝內(nèi)結(jié)扎，15d后進(jìn)行組織學(xué)觀察，確定建模是否成功。 Tips： 結(jié)扎材料有尼龍線、細(xì)絲線、橡皮圈、正畸用鋼絲等，其中正畸不銹鋼絲結(jié)扎的效果最好，成功率更高。 在建模過程中要定期檢查結(jié)扎材料是否脫落，或根據(jù)需要進(jìn)行更換。 此方法在結(jié)扎時(shí)可撥離牙頸處包裹的牙周組織，從而造成輕微的機(jī)械性損傷。 二 圖片 高糖黏性食料喂飼聯(lián)合其他方法 采用高糖低蛋白飼料飼養(yǎng)時(shí)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物會(huì)有牙周袋產(chǎn)生、牙槽骨吸收和炎性細(xì)胞浸潤等病理變化，但單獨(dú)使用此法建模效果一般，且耗時(shí)較長。現(xiàn)階段，高糖黏性食料喂飼常與其他手段聯(lián)合使用，輔助誘導(dǎo)動(dòng)物牙周炎的形成，或用于伴糖尿病牙周炎動(dòng)物模型的研究，可更好地模擬臨床上相應(yīng)患者的發(fā)病機(jī)制。 造模方法： Wistar大鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉。 用牙科探針分離第一、二磨牙牙間間隙，采用直徑為0.2mm的正畸不銹鋼絲結(jié)扎大鼠雙側(cè)上頜第一磨牙牙頸部，用持針器夾持結(jié)扎絲從大鼠上頜雙側(cè)第一磨牙遠(yuǎn)中腭側(cè)進(jìn)入，環(huán)繞上頜第一磨牙一周后，在腭側(cè)偏近中處結(jié)扎固定，結(jié)扎絲末端保留3mm回彎置于齦下，防止結(jié)扎絲劃傷口腔內(nèi)軟組織，且不損傷牙齦的結(jié)合上皮。 術(shù)后嚴(yán)密觀察大鼠的狀態(tài)，從實(shí)驗(yàn)當(dāng)天起喂食糖水，12小時(shí)后進(jìn)食，每天高糖飲食喂養(yǎng)( 飲用水為10%葡萄糖水，飼料為10%葡萄糖水浸泡變軟的常規(guī)飼料。術(shù)后每周檢查牙周結(jié)扎情況，并觀察牙周組織的狀況。 三 圖片 注射脂多糖（liposaccharide, LPS） 造模方法： 選取Wistar大鼠，大鼠下頜第二磨牙牙齦內(nèi)單獨(dú)注射LPS 10μg/μl, 并于第3、7、10天分批處死動(dòng)物，取下頜骨分別進(jìn)行組織學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)分析。 模型驗(yàn)證： 單獨(dú)注射LPS, 在第7天和第10天能夠引起典型的牙齦和牙周炎癥：滲出液明顯增多, 結(jié)合上皮根方遷移, 牙槽間隔的骨喪失, 破骨細(xì)胞活躍。在注射后的第10天, 下頜骨的兩側(cè)均可見到顯著的骨喪失趨勢。 總結(jié) 雖然牙周炎動(dòng)物模型為牙周炎疾病提供了大量重要數(shù)據(jù)，但其研究結(jié)果只能提供某種新型藥物安全性和潛在功效的初步信息，不能直接將這些結(jié)果等同于人類牙周炎的結(jié)果。另外，全身因素導(dǎo)致的個(gè)體差異很難解釋，一些口腔衛(wèi)生習(xí)慣差的群體并未表現(xiàn)出牙周炎癥，而某些口腔菌斑較少的人卻患上嚴(yán)重的牙周炎。真正能夠模擬人類牙周病自然發(fā)病機(jī)制、實(shí)用且重復(fù)性高的模型還亟待進(jìn)一步探索和研發(fā)。 來源： [1]唐彩金,曾啟新,方梅飛,等. 消退素 D1 治療實(shí)驗(yàn)性大鼠牙周炎的研究[Ｊ]. 口腔醫(yī)學(xué)研究, 2017,33（12）：1270-1273. [2]Nassar PＯ,Felipetti FA,Nassar CA,et al. Evaluation of effect of cyclosporine A on the bone tissue with induced periodontal disease to ligature in rats[Ｊ]. Transplant Proc,2013,45（2）：778-782. |
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