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科研實驗1新蟲 (初入文壇)
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動物實驗 細(xì)胞實驗 動物造模 | 特應(yīng)性皮炎動物模型
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新手爸媽是否被孩子的特應(yīng)性濕疹困擾，成年人是否被特應(yīng)性皮炎搞得無奈。涂抹了激素后，又復(fù)發(fā)，繼續(xù)涂抹，然而又復(fù)發(fā)了...隨著人們對AD研究的不斷深入，動物模型逐漸成為研究AD的發(fā)病機理及探索其治療手段的不可缺少的工具，故AD動物模型的開發(fā)和確立，對研究其發(fā)病機制和治療具有重要意義。 何為特應(yīng)性皮炎？ 特應(yīng)性皮炎(atopic dermatitis，AD，也叫特應(yīng)性濕疹)是一種常見的慢性、復(fù)發(fā)性炎癥性皮膚病，不同國家的兒童患病率為2.7%至20.1%，而成人患病率為2.1%至4.9%。主要表現(xiàn)為劇烈的瘙癢、明顯的濕疹樣變和皮膚干燥。其發(fā)病與遺傳、環(huán)境因素及精神壓力因素相關(guān)，研究表明染色體 3p26-22，3q13-21，15q14-21，17q21-25 和 18q11-12 區(qū)域存在AD易感位點及相關(guān)候選基因，并與AD發(fā)病密切相關(guān)。環(huán)境因素主要包括過敏原(如室塵螨、動物毛皮、花粉、食物) 、微生物(如金黃色葡萄球菌) 、環(huán)境污染物、氣候等因素。 典型AD表現(xiàn)為急性期以Th2細(xì)胞免疫為主的皮膚炎癥，隨著病情的發(fā)展和延續(xù)，炎癥形式逐漸由Th2細(xì)胞主導(dǎo)向Th1細(xì)胞主導(dǎo)轉(zhuǎn)化。 動物的選擇 常見模型動物包括家兔、大鼠、小鼠、豚鼠、犬等，其中小鼠是最常用的模型動物，其具有成本低、模型易建立且便于基因操作等優(yōu)勢。 造模方法 按照方法和誘因，AD 模型大致可以分為三類: ①自發(fā)動物模型; ②致敏劑誘導(dǎo)模型; ③基因方法建立模型。 一、自發(fā)AD 小鼠模型 造模方法1：選用Nc /Nga 小鼠，將Nc /Nga小鼠置于普通環(huán)境下接觸氣源性致敏原如塵螨，可以出現(xiàn)人類 AD 樣皮膚改變。6～8 周出現(xiàn)搔抓行為，隨后耳朵、臉頰、脖子和背部出現(xiàn)紅斑、水腫和出血。 組織病理學(xué)表現(xiàn)：表皮角化過度、增厚、海綿層水腫，真皮嗜酸性粒細(xì)胞單核細(xì)胞浸潤，且血清IgE水平升高。 模型的優(yōu)缺點：該小鼠被公認(rèn)為是最適宜研究 AD 的動物模型之一。但由于費用較高，一定程度上限制了其廣泛應(yīng)用。 造模方法2：選用DS-Nh小鼠。 DS-Nh小鼠為另一種在普通飼養(yǎng)環(huán)境下可以產(chǎn)生自發(fā)性皮炎的近交系無毛小鼠。其皮膚癥狀嚴(yán)重程度與血清總IgE 水平相關(guān)。在皮損處發(fā)現(xiàn)金黃色葡萄球菌感染，適用于研究金葡菌與AD發(fā)病之間的關(guān)系。 二、致敏劑誘導(dǎo) AD 模型 1 卵清蛋白( OVA) 致敏的 AD 模型 造模方法：無菌條件下，采用6周齡BALB/c雌性小鼠,第1日腹腔注射200 µg/mL OVA溶液0.5 mL系統(tǒng)致敏,第6日皮下注射100 µg/mL OVA溶液0.5 mL再次致敏。并于第18、39日背部局部貼含50 µL,1 000 µg/mLOVA的1.5 cm2的無菌紗布，每日更換，分2次局部致敏，各持續(xù)1周。第46日，觀察小鼠皮膚及其病理學(xué)改變，酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定血清中總IgE水平，統(tǒng)計成模率及動物死亡情況。 造模結(jié)果：AD模型小鼠皮膚肉眼可見潮紅、脫屑、偶見結(jié)痂等皮炎改變;病理可見表皮細(xì)胞增厚,過度角化,真皮內(nèi)淋巴細(xì)胞等浸潤。模型組小鼠血清總IgE水平顯著高于空白對照組的和生理鹽水組。成模率為94%，死亡率6%。 優(yōu)缺點：該模型敏感性高、成本較低且結(jié)果直觀，但造模時間較長，如果縮短造模時間，小鼠會出現(xiàn)較輕的皮炎改變。 2 半抗原致敏的AD模型 半抗原如惡唑酮(Ox) 和三硝基氯苯(TNCB) 常用來誘發(fā)過敏性接觸性皮炎，引起以Th1為主的免疫反應(yīng)。 造模方法：用Ox和TNCB 對無毛小鼠多次長期刺激，導(dǎo)致皮膚炎癥從典型的遲發(fā)型Th1為主向慢性Th2為主的炎癥反應(yīng)轉(zhuǎn)變。表皮過度增生，真皮淋巴細(xì)胞、肥大細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞浸潤，高表達 IL-4 且血清 IgE 升高。 優(yōu)缺點：該模型具有易可重復(fù)性、可預(yù)見性、低成本和相對快速的特點。 3 超級抗原致敏的AD模型 金黃色葡萄球菌定植或感染是 AD 最常見的加重或誘發(fā)因素之一。 從皮損中采集的金黃色葡萄球菌菌株中有 65% 可產(chǎn)生具有超抗原性質(zhì)的外毒素。超抗原只需極低濃度(1～10ng /mL) 即可激活大量的 T 細(xì)胞活化，產(chǎn)生極強的免疫應(yīng)答，且不需要抗原呈遞細(xì)胞的加工處理。將葡萄球菌外毒素 B( staphylococcal enterotoxin B，SEB) 反復(fù)致敏皮膚可引起 Th2 型為主的皮膚炎癥。 三、基因方法建立 AD 動物模型 包括炎癥因子相關(guān)基因（IL-4、IL-18、IL-31、IL-10） AD 模型、皮膚屏障相關(guān)基因 AD 模型等。 總結(jié) 研究AD動物模型對于深入了解過敏性皮膚炎癥極為重要。由于 AD涉及的病因非常復(fù)雜，因此研究其發(fā)病機制的動物模型類型多種多樣，在科學(xué)研究中，可根據(jù)不同的研究方向選擇相應(yīng)的動物模型，探討AD的發(fā)病機制，為其診斷治療提供依據(jù)和線索。 來源： 1.中國皮膚性病學(xué)雜志，2013 2.中國醫(yī)學(xué)文摘·皮膚科學(xué)，2016 |
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