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動物模型 | 肝癌動物模型的構(gòu)建
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動物模型 | 肝癌動物模型的構(gòu)建 肝癌(HCC)是世界第5大重要的癌癥之一，類型繁多，成年患者約90％是原發(fā)性肝癌和肝腫瘤。我國每年約有l(wèi)l萬人死于肝癌，居惡性腫瘤病死率的第2位。男性患HCC的風(fēng)險是女性的2—5倍，在小鼠中性別差異與人表現(xiàn)一致。目前，手術(shù)切除及肝臟移植是肝癌治療的首要選擇，然而肝癌發(fā)病隱匿，進展非常迅速，大多數(shù)患者確診時已失去手術(shù)最佳時機，病死率居高不下。因此，需要建立良好的肝癌動物模型是人類醫(yī)學(xué)研究的重要條件。 動物的選擇 主要選擇嚙齒類動物，其中大鼠、小鼠是主要的實驗動物。 造模方法 一、Hepal-6細胞誘發(fā)C57BU76J小鼠原位肝癌模型 造模方法：小鼠肝臟內(nèi)注射106個Hepal-6細胞，在注射后第10天用高頻超聲觀察肝臟接種部位并記錄，然后將其處死，取肝組織，進行肝組織病理學(xué)檢查。 模型特點：Hepal-6細胞懸液注射到C57BL／6J小鼠肝內(nèi)后可使小鼠體內(nèi)直接成腫瘤，這種方法不需要先期的體 內(nèi)適應(yīng)過程，而且C57B肌J小鼠具有頑強的抵抗力，容易飼養(yǎng)，也不需要特殊的環(huán)境，具有操作簡單、建模周期短、成功率高的特點。 采用Hep_G2細胞株建立裸鼠肝癌模型 造模方法：皮下注射Hep_G2細胞(1.2×106)，種植細胞14d后，活體處死小鼠測定瘤體直徑、重量及血清AFP濃度并進行病理學(xué)觀察。 模型特點：省去反復(fù)對癌細胞體內(nèi)外交替培養(yǎng)的復(fù)雜過程．周期短，成功率很高，達100％。 二、不同誘癌劑的誘癌方法 1、二乙基亞硝胺（diethylnitrosamine，DEN）誘發(fā)大鼠肝癌模型 造模方法：用 0.25% DEN水溶液按10mg/kg體重灌胃每周一次，其余時間 0.025% DEN水溶液由其自由飲用, 4周后, 停飲含DEN水而改飲滅菌自來水4周，使大鼠肝細胞損傷修復(fù)和代償增生。在損傷修復(fù)中損傷DNA誤配修復(fù)和微衛(wèi)星不穩(wěn)定導(dǎo)致基因突變加劇，繼而在DEN誘癌過程中加速癌變，減少肝功能損傷而促進肝硬化及癌變。至第18周末，誘癌成功率達100%。 模型特點：造模過程中以低濃度DEN通過自然飲水，誘發(fā)的大鼠肝癌接近自然過程，而且采用單一致癌劑，免受其他致癌因子的影響，有利于對病變的觀察和分析。 2、黃曲霉素 B1(AflatoxinB1，AFB1) 誘發(fā)大鼠肝癌模型 造模方法：將AFB1添加到飼料中定量食用，用含 AFB1 4～5μg飼料連續(xù)飼養(yǎng)大鼠 6周，90天左右誘癌率達100%。 模型特點：該方法投藥劑量小，給藥時間短，癌灶形成較早；癌前病變的肝細胞增生以透明細胞灶多見，伴發(fā)肝硬化程度較 DEN誘發(fā)的肝硬化程度輕，形成時間較晚。此種方法與人體腫瘤發(fā)生病因?qū)W較為近似，故此 類模型常用于腫瘤特點的研究。 三、移植性肝癌模型 根據(jù)受體動物不同移植性肝癌模型可分為正常動物移植性肝癌模型和免疫缺陷動物移植性肝癌模型。前者受體動物多為小鼠和大鼠，后者受體動物多為裸鼠、裸大鼠。建立移植瘤的基本條件是:腫瘤標本的取材應(yīng)在無菌條件下取新鮮、無壞死、無包膜的瘤組織，手術(shù)標本的取材應(yīng)在1～2h內(nèi)完成，移植瘤受體動物 (包括免疫缺陷動物)要求在4周齡左右。移植的最常用部位是背側(cè)皮下，或移植于肝臟內(nèi)、腹腔等部位。 1、移植性大鼠肝癌模型 移植性大鼠肝癌模型的使用率遠大于移植性小鼠肝癌模型。目前多采用瘤塊肝包膜下移植制作該模型，具體可以添加MDL科研助手微信進行咨詢。 用途：移植性肝癌動物模型主要用于抗癌藥篩選。 2、移植性小鼠肝癌模型 小鼠原位移植瘤的方法是先在小鼠身上進行異位移植瘤的制作，然后再原位移植，成功率為 95.6%，原位移植瘤模型晚期出現(xiàn)肝內(nèi)、皮下、腹膜后及腸系膜等廣泛淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移率為81.8%。 3、移植性裸鼠肝癌模型 采用皮下注射HepG2細胞株 (1.2×106)建立裸鼠肝癌模型，運用瘤細胞活體種植法，周期短，成功率達100%。腫瘤組織多數(shù)有完整的包膜，腫瘤直徑大于1cm時，中間多有灶性壞死，其生長行為與肝癌相似。 根據(jù)原位移植理論建立的人肝癌原位移植模型不僅維持了原有瘤組織的結(jié)構(gòu)，還保持了人體肝癌絕大部分生物學(xué)特性，特別是轉(zhuǎn)移特性，在宿主體內(nèi)能以類似于患者體內(nèi)的方式顯示其惡性行為。 四、轉(zhuǎn)基因動物肝癌模型 轉(zhuǎn)入動物體內(nèi)的外源性基因可為單基因 (如HBx、c-myc、SV40 等)，也可為雙基因 (如 c-myc/TGFα、c-myc/TGFβ1、HBx/c-myc等 )。轉(zhuǎn)入單基因建立的肝癌動物模型比轉(zhuǎn)入雙基因建立的動物模型成功率高，方法步驟簡單。 總結(jié) 隨著對肝癌治療和基礎(chǔ)研究的日益深入，通過基因打靶技術(shù)結(jié)合體細胞克隆技術(shù)、核酸干擾技術(shù)等可以將離體培養(yǎng)、基因敲除或基因定點修飾后的動物體細胞轉(zhuǎn)變成動物個體，將很好地解決動物轉(zhuǎn)基因效率低和基因表達方面的問題，這些可能成為肝癌動物模型的發(fā)展方向。 進一步利用基因技術(shù)或其他科學(xué)方法，研究出更符合人體肝癌多種生物學(xué)特性的動物模型，培育出更加符合實驗要求的、與人類近緣的、使其誘癌過程相似于人肝癌的發(fā)生過程，且誘癌率高, 實驗重復(fù)性好，便于進行藥物干預(yù)和療效分析的動物新品種，使肝癌動物模型的建立不斷改進、完善，將為肝癌的基礎(chǔ)理論和臨床應(yīng)用研究提供更理想的動物模型。  |
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