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28968058wj新蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
定量PCR--熒光定量PCR
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熒光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR,RTFQ PCR) 是1996 年由美國(guó)Applied Biosystems 公司推出的一種新定量試驗(yàn)技術(shù),它是通過(guò)熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性的探針,對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤,實(shí)時(shí)在線(xiàn)監(jiān)控反應(yīng)過(guò)程,結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行分析,計(jì)算待測(cè)樣品模板的初始濃度。 原理: PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí),報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收;剛開(kāi)始時(shí), 探針結(jié)合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴(kuò)增時(shí),Taq酶的5’端-3’端外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào),即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個(gè)熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步 前景: 實(shí)時(shí)熒光定量PCR的出現(xiàn),極大地簡(jiǎn)化了定量檢測(cè)的過(guò)程,而且真正實(shí)現(xiàn)了絕對(duì)定量。多種檢測(cè)系統(tǒng)的出現(xiàn),使實(shí)驗(yàn)的選擇性更強(qiáng)。自動(dòng)化操作提高了工作效率,反應(yīng)快速、重復(fù)性好、靈敏度高、特異性強(qiáng)、結(jié)果清晰。隨著生物芯片技術(shù)和熒光探針定量技術(shù)的結(jié)合,熒光定量PCR在醫(yī)學(xué)檢測(cè)及其他各個(gè)領(lǐng)域中的應(yīng)用前景將更加廣闊,令人欣喜。盡管如此我們也應(yīng)清晰認(rèn)識(shí)到,FQ-PCR技術(shù)在我國(guó)各個(gè)研究領(lǐng)域的應(yīng)用并不多見(jiàn),這就需要我國(guó)學(xué)者迎頭趕上,使FQ-PCR技術(shù)更充分地推廣,以推動(dòng)研究工作的快速發(fā)展。 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)平臺(tái)儀器設(shè)備包括實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)、多功能熒光檢測(cè)系統(tǒng)、核酸電泳系統(tǒng)、核酸純化儀、分子雜交箱、組織勻漿器、離心機(jī)、恒溫?fù)u床培養(yǎng)箱、移液器等多種儀器，這些儀器為基因診斷、文庫(kù)建立、基因組研究、大數(shù)據(jù)分析等提供良好的平臺(tái)。 |
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