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小木蟲論壇-學術(shù)科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » DNA重組 » 測序一直錯誤
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&夏至新蟲 (初入文壇)
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[交流]
測序一直錯誤 已有5人參與
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最近在把一段400bp左右的片段連接到載體上，用的是無縫克隆連接的，第一次連接完去測序，六個樣品，每個都出現(xiàn)堿基缺失或者堿基錯誤，還都發(fā)生在中間部位，有的在同源臂連接部分，有的在序列中間，（錯誤都不在測序前后100bp內(nèi)），換了一家無縫克隆的試劑盒（諾唯贊的）重新做了一次，最后取PCR產(chǎn)物去測序，結(jié)果又在不同的關(guān)鍵部位有堿基錯誤，每一個測序樣品都是。實驗做PCR全程用的高保真酶，現(xiàn)在不知道怎么辦了以前做無縫克隆從來沒有出現(xiàn)過這樣的情況啊有沒有大佬給指導一下啊 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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6樓2023-05-26 12:07:39
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1，你可以找小伙伴順帶幫你做一遍，看結(jié)果是否一樣。2，多個樣品出現(xiàn)序列與參考序列不一致，考慮是不是序列本身就是這樣的。可以把兩次的測序結(jié)果進行比對，看錯誤匹配處堿基是否一致，如果是一樣的，那表明你所用材料里的目標序列就是這樣的。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2023-05-25 22:25:58
shuaibia6
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3樓2023-05-26 08:48:38
&夏至
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4樓2023-05-26 11:13:05
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