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&夏至新蟲(chóng) (初入文壇)
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[交流]
測(cè)序一直錯(cuò)誤 已有5人參與
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最近在把一段400bp左右的片段連接到載體上，用的是無(wú)縫克隆連接的，第一次連接完去測(cè)序，六個(gè)樣品，每個(gè)都出現(xiàn)堿基缺失或者堿基錯(cuò)誤，還都發(fā)生在中間部位，有的在同源臂連接部分，有的在序列中間，（錯(cuò)誤都不在測(cè)序前后100bp內(nèi)），換了一家無(wú)縫克隆的試劑盒（諾唯贊的）重新做了一次，最后取PCR產(chǎn)物去測(cè)序，結(jié)果又在不同的關(guān)鍵部位有堿基錯(cuò)誤，每一個(gè)測(cè)序樣品都是。實(shí)驗(yàn)做PCR全程用的高保真酶，現(xiàn)在不知道怎么辦了以前做無(wú)縫克隆從來(lái)沒(méi)有出現(xiàn)過(guò)這樣的情況啊有沒(méi)有大佬給指導(dǎo)一下啊 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
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400bp如果克隆有問(wèn)題，還是送到公司直接合成吧，即快又節(jié)省時(shí)間，費(fèi)用也不高，你測(cè)克隆的錢(qián)都?jí)蛄?br />
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12樓2023-06-08 14:53:44
yudaoqian88
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1，你可以找小伙伴順帶幫你做一遍，看結(jié)果是否一樣。2，多個(gè)樣品出現(xiàn)序列與參考序列不一致，考慮是不是序列本身就是這樣的。可以把兩次的測(cè)序結(jié)果進(jìn)行比對(duì)，看錯(cuò)誤匹配處堿基是否一致，如果是一樣的，那表明你所用材料里的目標(biāo)序列就是這樣的。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
2樓2023-05-25 22:25:58
shuaibia6
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3樓2023-05-26 08:48:38
&夏至
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4樓2023-05-26 11:13:05
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