 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 748 | 回復(fù): 0 | |||
28968058wj新蟲 (小有名氣)
|
[交流]
實驗技巧|細(xì)胞劃痕，滿滿干貨
|
|
實驗技巧|細(xì)胞劃痕，滿滿干貨 細(xì)胞劃痕(wound healing）法是簡捷測定細(xì)胞遷移運動和修復(fù)能力的方法。 一、原理 在體外培養(yǎng)皿或平板培養(yǎng)的單層貼壁細(xì)胞上，用微量槍頭或其它硬物在細(xì)胞生長的中央?yún)^(qū)域劃線，去除中央部分的細(xì)胞，然后繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞至實驗設(shè)定的時間，取出細(xì)胞培養(yǎng)板，在顯微鏡下觀察并拍照記錄特定位置細(xì)胞的生長遷移能力。 通過不同分組之間的細(xì)胞對于劃痕區(qū)修復(fù)能力的不同，可以判斷各組細(xì)胞的遷移與修復(fù)能力的差別。 二、步驟 1、準(zhǔn)備： 所有能滅菌的器械都要滅菌，直尺和 marker 筆在操作前紫外照射 30 min（超凈臺內(nèi)） 2、流程： 1. 培養(yǎng)板劃線：先用 marker 筆在 6 孔板背后，用直尺比著，均勻得劃橫線，大約每隔 0.5~1 cm 一道，橫穿過孔，每孔至少穿過 5 條線； 2. 鋪細(xì)胞：在孔中加入約 5×105 個細(xì)胞，具體數(shù)量因細(xì)胞不同而不同，掌握為過夜能鋪滿； 3. 細(xì)胞劃線：第二天用槍頭比著直尺，盡量垂至于背后的橫線劃痕，槍頭要垂直，不能傾斜； 4. 洗細(xì)胞：用 PBS 洗細(xì)胞 3 次，去除劃下的細(xì)胞，加入無血清培養(yǎng)基； 5. 細(xì)胞培養(yǎng)及觀察：放入 37℃、5% CO2 培養(yǎng)箱，培養(yǎng)；按 0，6，12，24 小時取樣，倒置顯微鏡觀察特定位置細(xì)胞遷移情況并拍照； 6. 結(jié)果分析：使用 Image J 軟件打開圖片后，隨機(jī)劃取 6-8 條水平線，計算細(xì)胞間距離的均值。 三、注意事項 1、鋪細(xì)胞最好使用 6 孔板，因為 6 孔板可以保證有相當(dāng)距離的平直劃痕，而且因為有 5 條定位線，與劃痕相交，這樣就有10 個可固定監(jiān)測點，不作重復(fù)，誤差也很小。 2、如果你連續(xù)監(jiān)測 24 小時，你需要考慮到劃痕縮小是細(xì)胞遷移和細(xì)胞繁殖共同作用的結(jié)果，而不是單純的細(xì)胞遷移。 如果你要單純的考慮細(xì)胞遷移，你可以先用絲裂霉素（1 ug/ml）處理一小時，抑制細(xì)胞的分裂，這樣你的結(jié)果就是細(xì)胞遷移的作用了。另外，使用無血清培養(yǎng)基也可以降低增殖對實驗結(jié)果的影響。 3、照片拍完之后，可以用 ImageJ 來測量劃痕區(qū)域的像素定量比較細(xì)胞遷移的速度。 4、雖然無血清培養(yǎng)可以忽略細(xì)胞增殖的影響，但是由于細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)系統(tǒng)整體性的下調(diào)節(jié)，細(xì)胞遷移的速度也會慢很多。 5、應(yīng)盡量清洗掉散落的細(xì)胞，對于一些細(xì)胞，低血清濃度下也能重新貼壁并增殖，此外也影響數(shù)據(jù)美觀。 四、常見問題 1.劃痕法測量適用的細(xì)胞范圍較小，一般只適用于上皮細(xì)胞，纖維樣細(xì)胞。 2.雖然無血清培養(yǎng)可以忽略細(xì)胞增殖的影響，但是由于細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)系統(tǒng)整體性的下調(diào)節(jié)，細(xì)胞遷移的速度也會慢很多。 3、在用 PBS 緩沖液沖洗時，注意貼壁慢慢加入，以免沖散單層貼壁細(xì)胞，影響實驗拍照結(jié)果。 4、一般做劃痕實驗，需要排除細(xì)胞增殖的影響，一般在不影響細(xì)胞增殖的情況下采用低血清（<2%）或者無血清，否則細(xì)胞增殖就不能忽略，這樣對于遷移較慢的細(xì)胞就需要延長拍攝時間（也可用絲裂酶處理一小時）。 5、按照 6 孔板背后畫線的垂直方向劃痕，可以形成若干交叉點，作為固定的檢測點，以解決了前后觀察時位置不固定的問題。 6、每次拍照前、后，盡量換掉培養(yǎng)基，去除飄落的細(xì)胞，能得到較為干凈的劃痕區(qū)域。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
求助各位大佬，載藥PLGA納米粒易團(tuán)聚該如何解決？
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
博導(dǎo)推薦
已經(jīng)有2人回復(fù)
-
藥理學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有238人回復(fù)
-
哪里做甘氨酸受體與配體結(jié)合率的試驗
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
透明質(zhì)酸 甲基丙烯酸酐
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
305材料專碩調(diào)劑
已經(jīng)有12人回復(fù)
-
關(guān)于SCI雜志發(fā)表掛名
已經(jīng)有32人回復(fù)
-
CSC改派-博士生交流訪學(xué)
已經(jīng)有19人回復(fù)
-
中山大學(xué)-第七醫(yī)院-招科研助理1名（基因設(shè)計和克隆、RNA合成）
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
中山大學(xué)-第七醫(yī)院-招科研助理1名（基因設(shè)計和克隆、RNA合成）
已經(jīng)有1人回復(fù)
-
巴黎薩克雷大學(xué)與國家留學(xué)基金委合作博士研究生項目-脂質(zhì)納米藥物/生物材料/多酚遞送
已經(jīng)有10人回復(fù)
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 28968058wj 的主題更新
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 085600材料與化工調(diào)劑 280分 +10 | yyqqhh 2026-03-03 | 10/500 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 276求調(diào)劑 +8 | 路lyh123 2026-02-28 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 298 調(diào)劑 +3 | 小西笑嘻嘻 2026-03-03 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +7 | BrightLL 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境調(diào)劑 +6 | chenhanheng 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 278求調(diào)劑 +3 | 滿天星11_22 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +5 | kkcoco25 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 沒上岸的看過來 +3 | tangxiaotian 2026-03-01 | 3/150 |
|
|
|
[考研]
材料工程專碩283求調(diào)劑
 5+8
|
，��？ 2026-03-02 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 080500材料科學(xué)與工程 +4 | 202114020319 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0856材料求調(diào)劑 +12 | hyf hyf hyf 2026-02-28 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 261求調(diào)劑 +3 | 陸lh 2026-03-01 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 275求調(diào)劑 +7 | 明遠(yuǎn)求學(xué) 2026-03-01 | 7/350 |
|
|
|
[考博] 博士自薦 +4 | kkluvs 2026-02-28 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +8 | yang婷 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 熬夜的貓頭鷹 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑 +3 | aaadim 2026-03-01 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0856材料求調(diào)劑 +4 | 麻辣魷魚 2026-02-28 | 4/200 |
|
|
|
[基金申請]
剛錄用，沒有期刊號，但是在線可看的論文可以放為代表作嗎
10+3
|
arang1 2026-03-01 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +6 | 曼殊2266 2026-02-28 | 7/350 |
|