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像北風(fēng)向南鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
小鼠脾臟做流式細(xì)胞術(shù)的疑問
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第一次做流式細(xì)胞術(shù)，有些地方不確定特來請教。我的實驗是用病毒的某個蛋白做成疫苗，現(xiàn)在是在BALB/c小鼠上驗證免疫效果。 目前打算是取脾臟通過流式來檢驗免疫效果，看到網(wǎng)上和文獻里常做的一些指標(biāo)就是CD3、CD4、 CD8等細(xì)胞表面標(biāo)志物，還有細(xì)胞內(nèi)的一些因子如IFNr、IL2、IL10等。 我的問題是，流式或者類似的elispot實驗中，都需要在取脾細(xì)胞后加入抗原刺激細(xì)胞嗎？ 如果需要的話，是加完整的抗原蛋白進去還是加抗原蛋白的多肽庫呢？因為我看的一篇文獻里是用的多肽庫。 但是我查到我做的這個蛋白，多肽庫只在國外有，一萬多，太貴了而且貨期很長，總體來講不現(xiàn)實。 另外常用的刺激阻斷劑，離子霉素和PMA等是什么作用呢？離子霉素和PMA是作為陽性對照嗎？陽性對照的作用 是驗證我的細(xì)胞狀態(tài)沒問題對嗎？我理解是類似于WB實驗的內(nèi)參蛋白，不知道是否正確？ 最后我可以不加抗原刺激，直接用離子霉素和PMA刺激細(xì)胞嗎?這樣是不是就做不了陽性對照？ 或者我可以用完整的抗原蛋白加進去刺激嗎？因為我查一些資料顯示抗原在細(xì)胞內(nèi)被分解為多肽呈遞給T細(xì)胞發(fā)揮作用。 所以是不是只能加多肽進去才能刺激T細(xì)胞？ 本人第一次接觸流式，問了幾家公司的技術(shù)也整不明白，懇請各位大佬不吝賜教，萬分感謝！ |
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