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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 生物化學 » 抗體保存好，實驗失敗少
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28968058wj新蟲 (小有名氣)
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抗體保存好，實驗失敗少
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一、保存溫度和條件 很多抗體的最佳保存條件是分裝成小包裝凍存于-20°C或-80°C。分裝能使凍融引起的損失減到最小，同時可避免多次在一個管內取樣而由槍頭引入的污染。分裝凍存的抗體，融解一次后剩余抗體應保存于4°C。收到抗體后，應10,000 x g 離心20秒，使管口螺紋內的抗體溶液全部離心至管底，用低蛋白吸附性的微量離心管分裝。分裝量的多少取決于每次試驗的使用量。分裝量不能少于10μl；分裝量越少，由于蒸發(fā)和吸附于管內壁而引起的損失會越大。 除了腹水液含蛋白酶應立即凍存外，大多數(shù)抗體接收后可在4°C保存一至兩周，隨后可凍存以長期保存。同樣，應按照說明書推薦的條件進行保存。 二、特殊情況 1、酶聯(lián)抗體，不應凍存，4°C可保證穩(wěn)定。凍融會降低酶的活性，同時影響抗體的吸附能力。 2、偶聯(lián)標記的抗體，無論是標記的熒光染料、酶還是生物素，都應保存于深色的管內并包裹上鋁箔。如果暴露在光線下可能會減弱偶聯(lián)標記物的活性。熒光標記物尤其容易受到光漂白作用，整個實驗過程中均應避光。 3、免疫球蛋白G3同種型抗體凍融后易形成聚合物，因此應一直保存于4°C。 4、用疊氮化鈉防止污染 為防止微生物污染，在抗體溶液中應加入疊氮化鈉，終濃度為0.02%（質量百分比）。 5、什么時候不能用疊氮化鈉 如果用抗體標記活細胞，或用于體內實驗，確保所用制劑中不含疊氮化鈉。這種抗生素對大多數(shù)有機體都有毒性：會阻斷細胞色素電子傳遞系統(tǒng)的信號。 疊氮化鈉會干擾胺基的偶聯(lián)標記，應在進行標記之前將其除去。標記后抗體可保存于疊氮化鈉，也可用不含胺基的硫柳汞替代。疊氮化鈉可用透析或凝膠過濾法從抗體溶液中除去。免疫球蛋白 G的分子量是150,000 kDa（免疫球蛋白M的分子量是600,000 kDa），疊氮化鈉的分子量是65道爾頓。使用14,000 kDa的微量透析裝置，隨著疊氮化鈉的擴散，抗體將保留。將帶有燒杯的磁力攪拌器置于4°C攪拌透析裝置6小時 , 每毫升抗體溶液要用至少1升的磷酸鹽緩沖液。更換2次磷酸鹽緩沖液，每次均攪拌至少6小時。如果可以的話，所有材料均要求無菌，所有溶液都應無菌配制。 三、凍存 / 復蘇的損失 反復凍融可使抗體變性，使其形成聚合物而降低了抗體結合能力。 大多數(shù)抗體在-20°C保存就足夠了，沒有必要置于-80°C保存。千萬不要使用無霜的冰箱。反復凍融能減少霜的形成，但這正是應該避免的。同理，抗體應該放置于冰箱中溫度變化最小的部位，如應放置于冰箱格里，而不應放置于冰箱門上。 稀釋至工作濃度的抗體最好不要在4°C保存超過一天時間。通常蛋白質在較高濃度保存時不易發(fā)生降解，理想濃度為1mg/ml或更高，因為抗體溶液中包含了如牛血清白蛋白等蛋白質穩(wěn)定劑。加入的蛋白可吸附于管壁從而使抗體的損失減到最小。對用于聚合的抗體，不應加入蛋白穩(wěn)定劑，因為其可能會與抗體競爭而降低抗體的聚合活性。 |
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