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CipherLee新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
大腸桿菌BL21 CrisprCas9基因敲除
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最近在用雙質(zhì)粒系統(tǒng)pCas和ptargetF做BL21的基因敲除，敲出效率非常低，一個(gè)半月只敲掉了一個(gè)基因，有大佬指點(diǎn)一下這個(gè)實(shí)驗(yàn)有什么需要注意的嘛，效率為什么這么低，敲不掉是常事，我的ptargetF都測(cè)序了 都構(gòu)建成功的，pcas也是轉(zhuǎn)進(jìn)去了，其他就和大腸桿菌的常規(guī)操作一樣了，為什么敲不掉呀 @biostar2009 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
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黃黑波波
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樓主如果是用dsDNA做同源交換的話建議上下游同源臂有500bp左右，而且加上抗性篩選的話就很明顯，其他操作按照楊晟的文章應(yīng)該是問(wèn)題不大的，感受態(tài)濃度盡可能的濃，dsDNA也建議到300～1000ng/μl 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
2樓2023-04-12 19:42:03
黃黑波波
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3樓2023-04-12 19:44:24
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