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李鑫_LXXX新蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助！pMG36e質(zhì)粒連接目的片段后轉(zhuǎn)入DH5α后紅霉素抗性平板長滿菌落
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Sample Text 2022年購入一瓶biotopped的紅霉素1g并用10mL無水乙醇溶解，0.22μmPES濾膜濾菌，分裝后-20保存。去年于LB平板上使用的紅霉素濃度為300 μg/mL，此時紅霉素具有良好的篩選效果。 由于疫情原因提前回家，2023年1月底返回學(xué)校接著做時發(fā)現(xiàn)紅霉素?zé)o法起到篩選陽性克隆的效果，當(dāng)即更換新的紅霉素，用與之前相同的方法進(jìn)行母液配置及保存，但從現(xiàn)在開始事情不對了——300μg/mL紅霉素的LB抗性平板紙上長滿了菌，根本無法篩選出陽性克隆，此時我提高抗生素濃度至600ug/mL，空載的E.coli DH5α仍能夠肆意生長。 不死心的我更換了酷來博的紅霉素進(jìn)行實驗，同樣存在E.coli DH5α能夠生長的問題。 又看到有帖子講到：使用乙醇溶解的抗生素可不進(jìn)行濾菌處理直接使用。又購入一支抗生素，乙醇溶解后直接分裝保存。使用發(fā)現(xiàn)問題仍未解決。 在此試驗期間，加入紅霉素時LB瓊脂培養(yǎng)基的溫度保證不對紅霉素活性產(chǎn)生影響，同時也試過降低培養(yǎng)溫度、縮短培養(yǎng)時間等操作，但試驗依舊失敗。 Sample Text試問為什么會遇到這種情況？該如何解決問題？ |
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