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RVXK27951新蟲 (初入文壇)
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最近在做額m13 mp18噬菌體載體構(gòu)建，遇到以下幾個(gè)問題...
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最近在做額m13 mp18噬菌體載體構(gòu)建，遇到以下幾個(gè)問題： 1.噬菌體上有LacZ, 有一篇文獻(xiàn)說“M13是LacZa（+）, 因此每輪篩選時(shí)選藍(lán)斑，但是加入IPTG/Xgal后不是應(yīng)該選白斑嗎？我涂布出來的平板全部是白斑，沒有一個(gè)藍(lán)斑（圖1），這是為何？ 2.做陽(yáng)性克隆篩選的時(shí)候我選取了30來個(gè)單菌落，PCR能擴(kuò)增出目的條帶（400bp)，但很弱（圖2），然后挑取了能擴(kuò)增出條帶的菌落用生工質(zhì)粒提取試劑盒提質(zhì)粒，發(fā)現(xiàn)提取不了，沒有條帶（圖3），但是能測(cè)出來濃度，引物用的是基因引物； 3.我查了資料有的資料說是要PEG沉淀，得到雙鏈DNA，然后送去測(cè)序，我直接用的菌液或者質(zhì)粒進(jìn)行測(cè)序，測(cè)不出來，這是因?yàn)槲宜偷臉颖居袉栴}嗎？ @youlinglyw @wizardfan @飛約瘋?cè)嗽?/u> @biostar2009 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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