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qiafffff新蟲 (初入文壇)
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轉(zhuǎn)基因煙草觀察不到GFP熒光，請(qǐng)問(wèn)如何證明目的基因轉(zhuǎn)化成功？
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| 本人將目的基因連在帶有GFP標(biāo)簽的PBI121載體上，轉(zhuǎn)化煙草，然后轉(zhuǎn)基因煙草在DNA和RNA水平都鑒定過(guò)有條帶，但是在熒光顯微鏡下觀察不到GFP的熒光，請(qǐng)問(wèn)各位蟲友們，是什么原因啊？（之前做過(guò)瞬時(shí)的亞細(xì)胞定位，能觀察到熒光，證明載體應(yīng)該沒(méi)問(wèn)題，）我真的不知道該怎么判斷我的煙草是不是轉(zhuǎn)成功了，真誠(chéng)希望得到大家的回答，幫幫孩子吧 |
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hanxiaominhu
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2樓2022-10-31 11:43:50
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qRTPCR做過(guò)，轉(zhuǎn)基因煙草的表達(dá)量是上調(diào)的，還沒(méi)做過(guò)western，請(qǐng)問(wèn)您是說(shuō)拿GFP做western嘛，可是如果看不見(jiàn)熒光的話，是不是很大概率在總蛋白水平western也雜不到呀？ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
3樓2022-11-01 11:02:26
hanxiaominhu
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PCR你再可以試試一個(gè)引物在目的基因上，一個(gè)在GFP上。用GFP的抗體做western可以試試，說(shuō)不準(zhǔn)是別的原因?qū)е驴床坏綗晒狻?br />
發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2022-11-01 12:58:12
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5樓2023-05-19 23:38:23
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