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熒光抗體上機檢測卻發(fā)現所有細胞都會被染色
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大家好，我是流式熒光崔工，一個旨在鏈接與流式熒光相關的朋友，一起賺錢、一起學習、一起工作、一起生活的靚仔。 — 1 — 前面的文章前人拿血的教訓總結出來的經驗，我們要多學習學習，講了唐山打人事件總結出來的道理，那就是打得贏就打，打不贏就跑，希望大家在遇到危險的時候審時度勢，關鍵時刻能保命。 上個星期在上海待了幾天，拜訪了一些終端客戶，見了一些潛在合作經銷商，聊了一些粉絲好友。 從早上7點出門，回到酒店基本上都是8點以后，中飯基本上顧不上吃，倒也省事，等到晚上一起解決。 一位朋友介紹了一個交大的合作項目，后期有機會跟大家分享分享。 — 2 — 崔工，我標的FITC不太成功 好像和其他細胞、雜質全都結合了 能幫我看看是什么原因嗎？ M老師在快要下班的時候給崔工發(fā)來信息 能看得出M老師很著急，趁著還沒有下班感覺向崔工尋求幫助。 不過M老師不用急，正常情況下崔工的手機基本上都在身邊的，只要崔工看到消息了都會回，不會因為下班了就不回老師們的信息。 M老師可以太著急了，沒有把問題說清楚，崔工沒法幫忙分析具體的原因，就一步一步詢問具體的細節(jié)。 您標記的不是抗體？ 是的，標記的是抗體，CD3抗體。 那崔工能猜出是怎么樣一個情況，M老師可能是用FITC標記CD3抗體，再把標記好的熒光抗體加入樣本中上機檢測。 結果發(fā)現不單單是表達CD3抗體的細胞被染色了，而是所有的細胞都被染色了。 崔工把猜測跟M老師確認。 M老師說，對的，就是這樣，崔工你看圖是這樣的。 如果是這個問題，那崔工心里有底了，不是大問題。 為什么這么說？ 因為在前段時間蘇州的L老師也遇到過同樣的問題，崔工跟L老師交流后，問題就解決了。 但崔工不能直接把上次解決方案告訴M老師，怎么怎么做。 崔工還是按部就班的幫M老師梳理每個環(huán)節(jié)。 崔工問：你標記好抗體后有沒有去除多余的抗體或者FITC。 有的，用的是您家的蛋白離心式快速脫鹽柱。 M老師并不知道崔工心里已經知道是什么原因了，她還是很焦急的問道。 有哪些原因會導致實驗失敗呢，按道理FITC標記抗體是熒光染料標記抗體里最簡單的。 是的，FITC是熒光染料標記抗體里最簡單的，簡單但并不能代表一定就能馬上做成功。 崔工繼續(xù)回答道，能跟雜質、所有細胞都結合了，那說明肯定是有游離的FITC。 了解FITC標記抗體原理的都知道，FITC是很容易就和蛋白結合的。 如果抗體跟FITC交聯后，沒有把未交聯的FITC，也就是大家說的游離的FITC去除掉，游離的FITC是極易與蛋白結合。 這就很有可能出現前面M老師反應的那樣，其他細胞、雜質全都被染上了顏色。 既然已經知道問題所在了，那我們就想辦法把游離的FITC去除。 在以前的文章樣本的脫鹽方法有哪些？中，崔工介紹了3種方法，分別是超濾管、離心式快速脫鹽柱和透析袋。 在文章中，崔工分析了各種方法的優(yōu)缺點，總結出，最快、最便捷的是用離心式快速脫鹽柱。 崔工告訴M老師選擇一種方式把游離的FITC去除掉就可以了。 過幾天崔工詢問M老師，實驗進行的怎么樣，問題是否解決。 M老師很感激崔工，他的問題已經解決了，說有機會請崔工吃飯。 M老師其實不必客氣，M老師是通過崔工這個賬號鏈接上的合作。 崔工寫這個賬號的目的在每篇文章的開頭就寫清楚了，那就是鏈接與流式熒光相關的朋友，一起賺錢、一起學習、一起工作、一起生活。 今天的文章就分享到這，如果今天的文章對您有一點點幫忙或一絲絲的啟發(fā)，歡迎幫忙點個在看和轉發(fā)。 你也可以微信搜索mrcui128加崔工微信號或者搜索流式熒光崔工加崔工公眾號交流 |
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