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LS-Cui新蟲 (初入文壇)
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人偏肺病毒的可視化檢測 已有1人參與
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人偏肺病毒(hMPV) 是 2001 年在荷蘭發(fā)現(xiàn)的一種副黏病毒，是社區(qū)獲得性呼吸道感染較為常見的一種病原體，特別是嬰幼兒、老年人和免疫功能受損患者中急性呼吸道感染的重要病原體。hMPV感染會導(dǎo)致上呼吸道或(和)下呼吸道感染。以陜西科技大學(xué)錢衛(wèi)東教授牽頭的研究團隊在國際期刊《Virus Research》（病毒研究，2022年IF：6.286）雜志上發(fā)表了一篇，基于RAPID平臺與CRISPR-Cas12a結(jié)合的核酸快檢技術(shù)，應(yīng)用于人偏肺病毒的可視化檢測的文章。 該研究結(jié)合了重組酶和聚合酶等溫檢測 (RAPID)技術(shù)的強大擴增能力，以及Cas12蛋白質(zhì)高特異及反式切割活性，并分別結(jié)合熒光檢測與層析試紙條，開發(fā)出了可用便攜式熒光檢測儀或者可目視化觀察檢測結(jié)果的新技術(shù)，該技術(shù)使用更加方便快捷，未來可應(yīng)用于機場、社區(qū)、學(xué)校、家庭等場所，進一步拓寬了該檢測技術(shù)的應(yīng)用場景。近年來，基于CRISPR-Cas體系的快速檢測方法已開發(fā)出來并應(yīng)用于各種病原體，如SARS-CoV-2、豬繁殖與呼吸綜合征病毒、非洲豬瘟病毒、植物RNA病毒、食源性致病菌等。CRISPR-Cas12a體系用于檢測人偏肺病毒的應(yīng)用尚未建立。因此，陜西科技大學(xué)實驗室開發(fā)了一種RAPID/CRISPR-Cas12技術(shù)體系檢測技術(shù)，該體系診斷人偏肺病毒N基因具有極高的敏感性和特異性。檢測用時短，試劑成本低，儀器使用簡單，在臨床檢測方面具有顯著的優(yōu)勢。本研究構(gòu)建的兩種方法，熒光檢測和層析試紙條法分別可在35分鐘或者45分鐘完成。靈敏度可達6.97×102拷貝/ml，不會與其他呼吸道病原體，如人博卡病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、副流感病毒發(fā)生交叉反應(yīng)�？傮w而言，重組酶聚合酶等溫擴增和 Cas12a檢測的復(fù)合體系是可靠和快速檢測 hMPV的替代工具，特別適用于條件有限的資源匱乏地區(qū)。 原文鏈接：https://doi.org/10.1016/j.virusres.2021.198568 偏肺病毒的起源 人偏肺病毒是感染人呼吸道的一種臨床上較為多見的病原體。2001年首次在荷蘭一名兒童患者鼻咽分泌物中發(fā)現(xiàn)。這種病毒是單股負鏈RNA目，屬于副粘病毒科肺病毒亞科。當時由于這種新病毒與偏肺病毒屬中的禽類肺炎病毒核苷酸序列有較高的同源性，于是被稱為人偏肺病毒，后在2019年被國際病毒分類委員會正式命名為人偏肺病毒。 人偏肺病毒的流行病學(xué)特性 人偏肺病毒全年均可發(fā)病，流行季節(jié)多在晚冬、春季和夏季早期。近年來由于實驗室檢測技術(shù)的提高，臨床偏肺病毒的檢出率大幅度提升。有學(xué)者研究成果顯示人偏肺病毒是兒科呼吸道疾病中僅次于呼吸道合胞病毒的第二位致病病因，在兒科呼吸道疾病中起著非常重要的作用。此外由于各國各地地域壞境條件，檢測方法等的不同以及不同地區(qū)人群免疫狀況有所差別，造成偏肺病毒的感染率在世界各國都存在顯著差異。 人偏肺病毒感染的臨床癥狀 偏肺病毒的感染好發(fā)于嬰幼兒，癥狀嚴重程度可不一樣，有的患兒只有輕微的上呼吸道感染癥狀，但有的會造成嚴重的支氣管炎和肺炎，另外有少數(shù)患兒也可以沒什么臨床癥狀。最常見的臨床表現(xiàn)有咳嗽，肺濕啰音，發(fā)熱，喘息，鼻塞流鼻涕，氣促等。 傳播途徑和潛伏期 病毒可經(jīng)由直接或間接接觸而傳播。人類偏肺病毒感染多透過以下途徑接觸患者而傳播：咳嗽和打噴嚏的分泌物；密切接觸如觸摸或握手；和接觸那些受病毒污染的物件或表面，然后觸摸口、鼻或眼睛。潛伏期一般為3~6天。 人偏肺病毒的實驗室檢測 檢測人偏肺病毒感染的方法有三種，它們是分離培養(yǎng)、血清學(xué)檢測以及核酸檢測。 根據(jù)文獻分析，在諸多的hMPV檢測方法中，病毒培養(yǎng)是hMPV檢測的金標準；但hMPV生長緩慢，分離陽性率偏低，更多是用于實驗研究及藥敏試驗等。 酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）雖不適用于臨床早期診斷，但對于回顧性調(diào)查hMPV原發(fā)感染和再感染具有重要意義。 由于 hMPV在細胞中生長緩慢，臨床檢測主要采用逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)方法。hMPV N基因在核酸序列和氨基酸序列都是最保守的(分別為 91. 2% 和 98. 4%)，常用于 hMPV 檢測,G 基因是差異最大的(分別為 79% 和 59. 2%)，可用于分型，通過 real time RT-PCR擴增hMPV 這兩個基因，進行測序就可以鑒別診斷出hMPV的四種亞型。另有研究顯示僅檢測N基因也能鑒定出aMPV和hMPV所有亞型，PCR方法具有較高的特異性和靈敏度，但是需要專業(yè)的技術(shù)人員、貴重的儀器以及專門的實驗場地。 近年來興起的重組酶聚合酶擴增技術(shù)是一種有望替代PCＲ的新型核酸擴增技術(shù)，其主要基于重組酶聚合酶介導(dǎo)的擴增原理，體外模擬生物體內(nèi) DNA 復(fù)制，在恒溫條件下即可對目的片段實施擴增，尤其適用于各種病原體的快速檢測。相較于傳統(tǒng)聚合酶鏈式反應(yīng)而言，重組酶聚合酶擴增技術(shù)具有反應(yīng)溫度恒定、擴增速度快、檢測成本低、使用儀器簡單以及結(jié)果可靠等優(yōu)勢，尤其適用于現(xiàn)場快速檢測，對急需診斷結(jié)果的患者而言意義十分重大。重組酶聚合酶擴增技術(shù)在 hMPV 快速診斷中的應(yīng)用價值較高，可獲得較為理想的靈敏度、特異度以及準確度，有望成為替代傳統(tǒng)PCＲ的有效檢測方式，值得臨床推廣應(yīng)用。 RAPID技術(shù)平臺可用于hMPV的現(xiàn)場快速檢測，為hMPV的防控檢測提供一種新的、可靠的技術(shù)支持。 |
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