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利用無(wú)縫克隆構(gòu)建重組轉(zhuǎn)化子，效率真高，轉(zhuǎn)化子篩選8個(gè)全對(duì)
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利用無(wú)縫克隆構(gòu)建重組轉(zhuǎn)化子，效率真高，轉(zhuǎn)化子篩選8個(gè)全對(duì) 無(wú)縫克隆技術(shù)是一種新的、快速、簡(jiǎn)潔的克隆方法，可以在質(zhì)粒的任何位點(diǎn)進(jìn)行一個(gè)或多個(gè)目標(biāo) DNA 的片斷的插入，而不需要任何限制性內(nèi)切酶和連接酶。 突破傳統(tǒng)的雙酶切再加上連接，只需要一步重組法，即可得到高效率克隆的重組載體，大大提高了工作效率傳統(tǒng)克隆 • PCR 引物設(shè)計(jì)需引入載體上的酶切位點(diǎn)，PCR 產(chǎn)物再經(jīng)過(guò)酶切、膠回收、連接后定向克隆到目的載體上； • 需要查找合適的酶切位點(diǎn)，購(gòu)買各種內(nèi)切酶； • 陽(yáng)性率低； • 多個(gè)片段，通常只能分多次拼接。 無(wú)縫克隆 • 只需要一次反應(yīng)即可完成定向克隆，省略酶切、酶連等過(guò)程； • 對(duì)酶切位點(diǎn)無(wú)要求，可以把目的片段插入到任意載體的任意位點(diǎn)； • 連接片段之間不會(huì)引入任何其他序列； • 可以同時(shí)克隆多個(gè)片段。 無(wú)縫克隆的優(yōu)勢(shì) 相較于傳統(tǒng)克隆的方式，有幾點(diǎn)顯而易見的優(yōu)勢(shì)： 1. 可以不需要任何限制性內(nèi)切酶、連接酶，也不需要磷酸化、末端補(bǔ)平等操作； 2. 可同時(shí)連接多個(gè) DNA 片段，最多可達(dá) 10 個(gè)； 3. 不附加任何多余序列，精確定向連接； 4. 體系反應(yīng)時(shí)間僅需 15-30 min，快速反應(yīng)。 1.jpg |
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