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LS-Cui新蟲 (初入文壇)
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關(guān)注｜霍亂在全球多國零星暴發(fā)
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近日的熱搜被“霍亂”這個古老的傳染病承包了。7月9日，武漢大學(xué)出現(xiàn)一例感染性腹瀉病例，經(jīng)省市區(qū)三級疾控中心復(fù)核診斷為霍亂，13日武漢一家水產(chǎn)品市場售賣的甲魚，檢出4份霍亂弧菌陽性。 在世界范圍內(nèi)，阿富汗20人死亡，印度5人死亡，索馬里16人死亡，喀麥隆154人死亡……這一串沉重的數(shù)字，是今年在霍亂疫情中逝去的生命。 那么啥是霍亂？會傳染嗎？霍亂弧菌又是什么？怎么檢測呢？跟著小樂一起來了解一下。 1、什么是霍亂 霍亂是因攝入的食物或水受到霍亂弧菌污染而引起的一種急性腹瀉性傳染病。每年，估計有300萬～500萬霍亂病例，另有10萬～12萬人死亡。病發(fā)高峰期在夏季，能在數(shù)小時內(nèi)造成腹瀉脫水甚至死亡。 2、霍亂的傳播途徑 被污染的水源及海產(chǎn)品都可以作為傳播途徑。劇烈腹瀉往往對人體造成較大危害，會出現(xiàn)脫水等癥狀。 霍亂不會通過空氣傳播，也不能通過皮膚直接傳播，主要經(jīng)過消化道途徑進行傳播，也就是經(jīng)過糞口途徑傳播。例如手接觸到感染了霍亂弧菌的東西后沒有洗手就直接拿東西吃，或者與霍亂確診患者同食，那就有可能出現(xiàn)感染。 因此霍亂的傳染源分為兩類：第一類是具有典型臨床表現(xiàn)的霍亂患者，其排泄物及嘔吐物中都含有大量的霍亂弧菌，由于頻繁的腹瀉和嘔吐，可以污染周圍環(huán)境，導(dǎo)致水源食物被污染。 第二類是帶菌者，指沒有典型的臨床表現(xiàn)，但是糞便中帶有霍亂弧菌的人，包括潛伏期帶菌、恢復(fù)期帶菌以及健康帶菌，這幾類人群由于沒有癥狀而沒有被隔離，反而可以帶菌到處活動成為傳染源。 3、感染霍亂后有哪些癥狀？ 大多數(shù)情況下，感染只造成輕度腹瀉或根本沒有癥狀，典型的癥狀表現(xiàn)為劇烈的無痛性水樣腹瀉，嚴(yán)重的一天腹瀉十幾次。感染霍亂后，如果治療不及時或不恰當(dāng)，會引起嚴(yán)重脫水導(dǎo)致死亡。 4、什么人容易感染霍亂？ 人群普遍易感，胃酸缺乏者尤其易感。 5、什么時候容易得霍亂？ 我國的流行時間為3至11月份，6至9月份是流行高峰。 6、霍亂的潛伏期和傳染期多少？ 潛伏期數(shù)小時至5天，通常2至3天。糞便陽性期間有傳染性，通常至恢復(fù)后幾天。偶有攜帶者傳染期持續(xù)數(shù)月。對霍亂弧菌有效的抗菌藥物可縮短傳染期。 7、霍亂弧菌是什么？ 霍亂弧菌（V.cholera）是人類霍亂的病原體�；魜y弧菌屬于弧菌科，革蘭氏陰性菌。生態(tài)環(huán)境位于沿海水域和河口，通常與浮游動物和貝類有關(guān)。 目前，根據(jù)“O”抗原的變異，已鑒定出超過 200 種霍亂弧菌 ，大多數(shù)霍亂弧菌菌株不致病。到目前為止，只有屬于血清群 O1 和 O139 的菌株與流行性霍亂有關(guān)。 大多數(shù)的疾病暴發(fā)由O1型霍亂弧菌引起，而1992年首次在孟加拉國確定的O139型僅限于東南亞一帶。非O1非O139霍亂弧菌可引起輕度腹瀉，但不會造成疾病流行。近幾年，在亞洲和非洲的一些地區(qū)發(fā)現(xiàn)了新的變異菌株。據(jù)觀察認為，這些菌株可引起更為嚴(yán)重的霍亂疾病，死亡率更高。 霍亂弧菌存在于水中，最常見的感染原因是食用被患者糞便污染過的水�；魜y弧菌能產(chǎn)生霍亂毒素，造成分泌性腹瀉，即使不再進食也會不斷腹瀉，洗米水狀的糞便是霍亂的特征。 8、霍亂弧菌的形態(tài) 新從病人分離的霍亂弧菌比較典型，為革蘭氏陰性菌，菌體彎曲呈弧狀或逗點狀，菌體一端有單根鞭毛和菌毛，無莢膜與芽胞。經(jīng)人工培養(yǎng)后，易失去弧形而呈桿狀。取霍亂病人米泔水樣糞便作活菌懸滴觀察，可見細菌運動極為活潑，呈流星穿梭運動。在液體培養(yǎng)基內(nèi)常呈單個、成對成鏈狀，有的相連呈S形，甚至螺旋狀。 9、霍亂弧菌的檢測方法 目前用于霍亂弧菌檢測的方法主要有微生物學(xué)方法、分子生物學(xué)方法和免疫學(xué)方法。 微生物學(xué)檢測方法 目前，霍亂診斷在疾病暴發(fā)管理中的黃金標(biāo)準(zhǔn)仍然是通過選擇性培養(yǎng)基從糞便樣品中分離出細菌，然后進行生化鑒定和血清分型。 霍亂弧菌營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上即可生長良好，在堿性蛋白胨水中生長迅速，因此常以其作為選擇性增菌培養(yǎng)基。用選擇性培養(yǎng)基，如 TCBS 瓊脂進行分離，在 TCBS 上直徑 2–4 mm 的有光澤的菌落可被認為是霍亂弧菌，大約需要8天才能確認是否為霍亂病例。并且這些可疑的菌落還需生化試驗證實，然后進行血清群確認，并確定抗生素耐藥性 ，或通過使用開發(fā)用于靶向基因組DNA的O1和O139的引物進行PCR，從而對結(jié)果進行綜合評定，由此可判斷是否為霍亂弧菌。 微生物學(xué)檢測方法靈敏度和特異性較好，但其檢測耗時長、工作量大，且易受環(huán)境、培養(yǎng)條件及操作人員主觀因素等條件影響，不能滿足疾病防控快速反應(yīng)體系的需求，不利于臨床快速診斷。 免疫學(xué)診斷方法 該法主要是以霍亂毒素( CT) 為目的抗原，以單克隆抗 CT 抗體為反應(yīng)素， 通過致敏乳膠顆�；蛎笜�(biāo)記物、膠體金標(biāo)記物快速檢測 CT 的一系列免疫學(xué)試驗。這些試驗的敏感性、特異性以獲得高效價和高特異性的抗 CT 抗體為基礎(chǔ)，包括乳膠凝集試驗 ( RPLA) 、酶聯(lián)免疫吸附試驗( ELISA) 、膠體金免疫層析等。檢測前通常先將待檢霍亂弧菌菌株在 CAYE、AKI 等培養(yǎng)基中培養(yǎng)，促進毒素基因的表達以提高檢出率。 免疫學(xué)診斷方法由于檢測用的抗體獲取不易，活性易降低儲存較難，弧菌科存在抗原交叉性且霍亂弧菌本身的生物學(xué)特性———存在抗原變異現(xiàn)象，致使結(jié)果準(zhǔn)確性不夠，這是導(dǎo)致很多免疫學(xué)快速檢測方法至今仍難以廣泛使用的主要原因。 分子生物學(xué)檢測方法 以聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)為代表的分子生物學(xué)檢測方法，在近幾十年發(fā)展迅速。 1987 年，PCR 的發(fā)明實現(xiàn)了細菌高靈敏度的檢測。因為它通過放大目標(biāo)而不是信號來檢測生物體，因此不太容易產(chǎn)生假陽性。目標(biāo) DNA 可在不到 1 h 內(nèi)擴增 100 萬倍，理論上靈敏度可達到檢測單一目標(biāo)病原體。PCR 因具有簡單、快速、敏感、特異性強等優(yōu)點，在病原微生物包括霍亂弧菌的檢測應(yīng)用中已較為廣泛。方法上有雙重PCR、多重 PCR、巢式 PCR，擴增的目標(biāo)基因分兩類:毒力基因如 ctxA、ctxA2 － B、tcpA、tcpB、ace 等; 種特異性基因 rtxA、epsM、mshA、ompW、O1 和 O139 群特異的 rfb、zot 等。最常用的 PCR 主要是針對 ctxA、tc-pA 的檢測。 目前，傳統(tǒng)選擇性培養(yǎng)基分離培養(yǎng)鑒定法仍是霍亂弧菌檢測的主要方法，先增菌培養(yǎng)后結(jié)合生化及血清學(xué)方法進行鑒定，這種方法雖然檢測結(jié)果準(zhǔn)檢測目標(biāo)單一且耗時長等缺點，為實現(xiàn)霍亂弧菌等致病菌的快速檢測，技術(shù)人員建立了酶聯(lián)熒光免疫檢測法、膠體金確，但卻存在操作煩瑣、檢測效率與檢測靈敏度低、試紙條法、API 生化鑒定試紙條法、實時熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR ）、環(huán)介導(dǎo)恒溫擴增（LAMP）等方法。其中，實時熒光 PCR 及其他相關(guān)的改良方法如雙啟動寡核苷酸引物 - 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（DPO-PCR）法等以其靈敏度高、操作簡便快捷等顯著優(yōu)勢，近年來在霍亂弧菌等致病菌的檢測中，得到越來越廣泛應(yīng)用 ，但是熒光檢測相關(guān)設(shè)備存在售價偏高、引物探針設(shè)計要求較高、產(chǎn)物片段偏小等缺陷，在很大程度上限制了其推廣應(yīng)用，基層實驗室及非實驗室環(huán)境下現(xiàn)場檢測的推廣應(yīng)用更是受到了極大限制。 重組酶聚合酶擴增技術(shù)是繼LAMP之后的另一種等溫核酸擴增技術(shù)，具有反應(yīng)時間短、恒溫實現(xiàn)核酸的解鏈和退火、檢測結(jié)果易辨識等優(yōu)點。 重組酶聚合酶擴增技術(shù)檢測方法特異性強，靈敏度與普通 PCR 方法及LAMP方法相當(dāng)，但重組酶聚合酶擴增技術(shù)檢測方法相比普通PCR方法，反應(yīng)更為快速，且該方法無需依賴PCR儀，更易滿足基層單位和現(xiàn)場檢測的需要。而相比于LAMP，重組酶聚合酶擴增技術(shù)的引物設(shè)計難度更小、產(chǎn)物片段單一，且便于后續(xù)進行測序確證，因而具有更高的使用價值。 RAPID技術(shù)平臺可用于霍亂弧菌的現(xiàn)場快速檢測，為霍亂弧菌的防控檢測提供一種新的、可靠的技術(shù)支持。 |
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