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Hxiaopl新蟲(chóng) (初入文壇)
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[交流]
質(zhì)粒提取電泳條帶不正確 已有5人參與
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想請(qǐng)教一下，提完質(zhì)粒跑電泳，質(zhì)粒大小是5000bp，但是條帶只有第一次電泳正確了，后面用這管提取的質(zhì)粒再次電泳一直在8000bp，沒(méi)有目的條帶，重新?lián)u菌提取也是在8000bp，這是怎么回事呀 用的天根質(zhì)粒小提試劑盒 雙酶切再次電泳也是8000多bp，然后接著拿去做酶切連接轉(zhuǎn)化，驗(yàn)證的質(zhì)粒構(gòu)建是否成功的時(shí)候，再次雙酶切，還是只有8000多的條帶，沒(méi)有插入的片段（700bp），但用質(zhì)粒pcr，又能p出插入片段的條帶 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
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2樓2022-07-19 08:06:28
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3樓2022-07-19 10:05:32
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就是提取完質(zhì)粒去電泳，條帶第一次正確，第二次就不對(duì)了，看了網(wǎng)上的分析，就酶切后再去跑電泳，還是條帶不正確，用的都是用一次提取的質(zhì)粒。就是不明白為什么條帶會(huì)突然不正確，不敢往下做 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
4樓2022-07-19 10:07:37
司靜Jing.
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5樓2022-07-19 10:52:44
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謝謝，就是我重新提取了一遍質(zhì)粒，然后還是條帶不正確，我試著繼續(xù)往下做了，插入目的片段，酶切連接轉(zhuǎn)化，通過(guò)提取轉(zhuǎn)化的菌的質(zhì)粒，進(jìn)行pcr，可以得到插入片段的條帶，但是還是得不到正確的質(zhì)粒大小的條帶，我感覺(jué)像沒(méi)做出來(lái)，又像做出來(lái)了 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
6樓2022-07-19 10:58:38
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要確定一下這個(gè)質(zhì)粒大小是否真的是5000bp，因?yàn)殡p酶切得到的結(jié)果也是8000bp，要確定一下是不是接的菌就有問(wèn)題呀？ 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
7樓2022-07-19 13:32:07
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要不做個(gè)藍(lán)白斑試驗(yàn)，看看有沒(méi)有接上去？ 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
8樓2022-07-21 15:47:56
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9樓2022-07-30 15:57:17
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分子生物模糊不得 有就是有，沒(méi)有就是沒(méi)有。建議樓主都確定了再往下做，不然重新做一遍構(gòu)建很累人 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
10樓2022-08-07 03:05:57
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