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zhby887061銅蟲 (初入文壇)
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[交流]
創(chuàng)制「動脈粥樣硬化模型」的方法
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01 高脂、高膽固醇飼料誘導法 高脂飼喂法早在20世紀70年代已被采用，至今仍是模擬AS模型最重要的方法。特點是死亡率低，可長期觀察，但費時久 造模機制：動物機體脂質(zhì)代謝紊亂，血脂升高，容易引起血管內(nèi)皮損傷，導致血管內(nèi)皮功能紊亂、通透性增高，最終導致血管壁的脂質(zhì)浸潤、形成動脈粥樣硬化。 造模方法：在動物飼料中加入過量的膽固醇和脂肪。（在基礎飼料前提下，添加膽固醇、蛋黃、豬油。根據(jù)不同實驗目的，采用不同配方。） 通常在一定范圍內(nèi)，飼料中膽固醇含量愈高，血漿中膽固醇含量升高亦愈明顯，AS病變發(fā)生也愈快。但血漿中膽固醇水平與AS的形成和病變程度并非正相關，過高的血漿膽固醇水平常引起動物中毒甚至死亡。 由于嚙齒類動物(如小鼠、大鼠）對膽固醇幾乎不反應，為了促進病變的形成，在高脂、高膽固醇飼料中可加入膽酸鹽、甲基硫氧嘧啶、丙基硫氧嘧啶、甲亢平、苯丙胺、維生素D、煙堿或蔗糖等，可進一步加速動脈病變的形成。 優(yōu)點：操作簡單，成本較低，較符合人類飲食的特點，病理改變與人早期相似。 缺點：造模時間較長，不易形成類似人體的后期粥樣斑塊病變，期間易導致繼發(fā)感染從而影響實驗的穩(wěn)定性。 適用于：早期動脈粥樣硬化的研究 02 免疫損傷法 AS的發(fā)病機制有免疫因素的存在，所以可以從免疫學的角度來建立AS模型，如使用牛血清白蛋白、卵清白蛋白、肺炎衣原體、EB病毒、巨細胞病毒、幽門螺桿菌、內(nèi)毒素等進行免疫刺激，從而誘發(fā)AS的產(chǎn)生。 造模機制：免疫刺激引起動脈粥樣硬化斑塊形成及sCD40L水平升高，從而引起動脈粥樣硬化。 （1）將大鼠主動脈勻漿給兔注射，可引起血膽固醇、β-脂蛋白及甘油三脂升高。 （2）給兔注射馬血清10ml/kg/次，共4次，每次間隔17天，動脈內(nèi)膜損傷率為88%，冠狀動脈亦有粥樣硬化的病變；同時給予高膽固醇飼料，病變更加明顯。 （3）兔喂飼含1%膽固醇的飲料，靜脈注射牛血清白蛋白250mg/kg，可加速高膽固醇飼料引起的動脈內(nèi)膜病變形成。 優(yōu)點：建模時間短、成活率高、模型穩(wěn)定、可控性好。 缺點：所形成的單純免疫性炎性不能涵蓋動脈粥樣硬化炎性反應過程，其病理特征也有待進一步觀察。 適用于：動脈粥樣硬化發(fā)病機制的研究 03 血管內(nèi)皮損傷法 造模機制：通過外力損傷血管內(nèi)皮細胞，使血管內(nèi)皮通透性、黏附性、血液凝固改變，造成動脈內(nèi)膜損傷或功能障礙，再輔助性飼喂高脂、高膽固醇飲食，可誘導動脈粥樣硬化形成。 根據(jù)不同的外力，血管內(nèi)皮損傷法可以分為機械損傷法和物理生化因子損傷法。前者主要是用球囊導管、鋼絲套圈或金屬絲等來損傷血管內(nèi)皮，而后者則是用化學藥品、電刺激、空氣干燥或放射線等來損傷血管內(nèi)皮。 其中球囊損傷法具有可靠性強、可重復性高、更符合臨床動脈粥樣硬化疾病的發(fā)生發(fā)展過程等優(yōu)點。 ▶ 球囊損傷法 方法：將球囊導管插入血管后，將球囊充氣，反復進出牽拉3次，以損傷血管內(nèi)膜。 大鼠：將充滿生理鹽水的塑料球囊導管自頸外動脈進入胸主動脈，向外拉至頸外動脈再進入胸主動脈，反復3次，再喂以高脂、高膽固醇飲食8周后，可以出現(xiàn)明顯動脈粥樣硬化病變。 注意：球囊損傷管到達頸總動脈中段后，進行反復牽拉時，用力一定要輕，以防動物意外死亡。 優(yōu)點：時間短，定位明確，易于評價，并可根據(jù)不同的研究目的和動物，選用不同的動脈造模。 缺點：形成的斑塊較易脫落而形成血栓，若球囊大小控制不佳會導致動脈破裂或建模失敗。 適用于：動脈粥樣硬化的用藥或轉(zhuǎn)基因治療實驗的研究 ▶ 氣體干燥法 方法：空氣干燥法是以流量為50-250ml/min的干燥清潔氣流吹實驗部位的動脈血管內(nèi)膜5-15min，以造成內(nèi)膜內(nèi)皮細胞變性和功能減退，建立動脈粥樣硬化模型。 優(yōu)點：成模時間短，操作柔和，內(nèi)膜變化更接近自然狀態(tài)下動脈粥樣硬化形成的進程，可控性強，不易損害到血管的其他部位。 缺點：氣流吹的部位要相對恒定，不宜過長，時間也要充足，若內(nèi)皮損傷輕則不能形成動脈粥樣硬化。 適用于：動脈粥樣硬化內(nèi)皮細胞作用的研究 04 動脈結(jié)扎法 方法：對血管結(jié)扎縫合使血管內(nèi)血流速度和切應力發(fā)生改變，建立動脈粥樣硬化模型。 優(yōu)點：對內(nèi)膜損害小且能保留血管彈性變形的能力。 缺點：需精良的設備，手術操作技術難度大、要求高。 05 基因改造法： 由于鼠具有抗AS性，各種基因敲除和轉(zhuǎn)基因小鼠是近年來的研究熱點之一。脂蛋白 E（ApoE）或低密度脂蛋白受體（LDL-R）基因敲除鼠可自發(fā)形成動脈粥樣硬化斑塊，是動脈粥樣硬化研究的常用模型。 優(yōu)點：能自發(fā)產(chǎn)生動脈粥樣硬化。 缺點：基因改造小鼠體積小，臨床性檢查評估很難，與人類脂類代謝差異較大，存在一定的局限性。 適用于：動脈粥樣硬化炎癥和免疫因子的作用機制研究 06 聯(lián)合法 高脂喂養(yǎng)造成的動物高脂血癥是引起動脈粥樣硬化的基礎。而各種方法導致內(nèi)膜損傷，加快了動脈粥樣硬化的形成，從而節(jié)省造模所需要點時間。 |
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