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zhby887061銅蟲 (初入文壇)
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裸鼠皮下荷瘤步驟
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研究中廣泛使用的是人源腫瘤細(xì)胞系異種移植，是將體外傳代培養(yǎng)的人源腫瘤細(xì)胞接種到免疫缺陷的小鼠上觀察腫瘤的生長(zhǎng)，用來研究腫瘤細(xì)胞增殖或進(jìn)行體內(nèi)藥物篩選實(shí)驗(yàn)的模型。 由于裸鼠的免疫缺陷，在一定情況下，不排斥來自異種動(dòng)物的組織移植。因此成為移植人類腫瘤的接受體。接下來，為大家詳細(xì)介紹裸鼠皮下荷瘤步驟： 1、細(xì)胞準(zhǔn)備 ⑴腫瘤細(xì)胞的傳代擴(kuò)增 取凍存于液氮的腫瘤細(xì)胞復(fù)蘇并擴(kuò)增，確保腫瘤細(xì)胞的活力和良好的生長(zhǎng)狀態(tài)。首先，從液氮罐里取出凍存的細(xì)胞株，進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇，復(fù)蘇后的細(xì)胞會(huì)漸漸恢復(fù)活力、迅速增殖。當(dāng)貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞覆蓋了培養(yǎng)皿底面的80%以上時(shí)，就要進(jìn)行細(xì)胞的傳代培養(yǎng)，傳代會(huì)給細(xì)胞提供更多的生長(zhǎng)空間和足夠的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。 ⑵計(jì)算細(xì)胞接種量 提前計(jì)算確定細(xì)胞數(shù)量，一般注射40只小鼠，至少需要準(zhǔn)備50只小鼠的細(xì)胞量。 2、裸鼠準(zhǔn)備 一般選擇5-6周裸鼠（體重18-20g左右），小于4周動(dòng)物可能不耐受而過早死亡，大于6周免疫力會(huì)增強(qiáng)，不易成瘤。同批實(shí)驗(yàn)鼠要保證個(gè)體差異小。 3、操作步驟 ①當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)到我們需要的數(shù)量時(shí)，就可以進(jìn)行收集，胰酶消化收集細(xì)胞，計(jì)數(shù)后并調(diào)整到合適的濃度（PBS或者無血清培養(yǎng)基稀釋細(xì)胞，若不易成瘤可添加matrigel促進(jìn)成瘤）。 ②接種時(shí)選擇好部位進(jìn)針，建議接種前用75％酒精棉球擦拭消毒進(jìn)針位置。 ③針頭在皮下走一段再注射，速度不可太快，一般體積為100-200μL，可看見明顯的鼓包。 ④注射完畢后，緩慢旋轉(zhuǎn)拔出注射器，然后將小鼠放回籠內(nèi)繼續(xù)飼養(yǎng)，大概1周后可看到腫瘤出現(xiàn)。一般當(dāng)小鼠皮下長(zhǎng)出約綠豆大小的腫瘤塊時(shí)，我們便可每隔2-3天進(jìn)行腫瘤體積的測(cè)量，動(dòng)態(tài)反應(yīng)藥物的抗腫瘤效果。根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)間處死小鼠，取腫瘤，拍照。 |
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