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Tiancccccc鐵蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
巨噬細(xì)胞raw 264.7給藥問(wèn)題
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我需要把細(xì)胞種96孔板養(yǎng)24h后，再給藥24，但是我現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)只給溶劑都會(huì)讓我的細(xì)胞狀態(tài)變很差。 溶劑是7.5微升TAE/Mg 2+（40 mM Tris base (pH 8.0), 20 mM acetic acid, 2 mM EDTA, and 12.5 mM magnesium acetate），然后加空白培養(yǎng)基稀釋到100微升 整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程：用到的所有溶液都會(huì)在37度預(yù)熱 1.細(xì)胞15000個(gè)/孔種96孔板，培養(yǎng)基是10%FBS完全培養(yǎng)基，培養(yǎng)24h; 2.24h后棄掉70微升培養(yǎng)基，然后加200微的空白培養(yǎng)基，再棄去200微的孔內(nèi)溶液，反復(fù)洗三次，最后孔內(nèi)剩了30微空白培養(yǎng)基（這樣做是因?yàn)橹白鰧?shí)驗(yàn)換液吸干pbs清洗的時(shí)候，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞總會(huì)飄起來(lái)很多，我以為是換液的時(shí)候?qū)е录?xì)胞脫落等讓我的實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)問(wèn)題，就改成了這種方法去除掉舊培養(yǎng)基，細(xì)胞在清洗給藥過(guò)程雖然不飄了，但是發(fā)現(xiàn)給溶劑后細(xì)胞還是不行）； 3.空白孔加70的空白培養(yǎng)基；溶劑組加70微的稀釋了藥物的空白培養(yǎng)基，最終孔內(nèi)100微，藥物溶液含7.5微，需要給藥24h。 4h之后我去觀察了一下，細(xì)胞還是很好的，很正常。到第二天我再來(lái)看就不行了，空白組和溶劑組差得很明顯。沒(méi)有觀察到明顯的飄起來(lái)的細(xì)胞，這個(gè)溶劑別人也用過(guò)，正常來(lái)說(shuō)不應(yīng)該出現(xiàn)這種情況，如果溶劑都有這么明顯的不正常情況，那我后面再做給藥的結(jié)果也不可靠。我現(xiàn)在唯一能猜測(cè)到的是7.5微體積太大了，影響了它的生長(zhǎng)，但是空白培養(yǎng)基細(xì)胞就長(zhǎng)得很好啊（ㄒoㄒ） 想請(qǐng)各位大佬指教一下，我已經(jīng)卡在這很久很久了 感激不盡！ @youlinglyw@biostar2009 |
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