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Tiancccccc鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
96孔板樣巨噬細胞并給藥
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各位大佬，我最近在做elisa試驗，需要測給藥后巨噬細胞的培養(yǎng)基里的細胞因子，但是重復(fù)性一直不好，后來就整個過程找原因。 我是種板24h，然后就吸干培養(yǎng)基里的培養(yǎng)液，再加100微升的pbs洗一遍，棄去之后加稀釋了藥物的空白培養(yǎng)基。過程當(dāng)中用到的所有溶液都在37度預(yù)熱，但是我給完藥之后發(fā)現(xiàn)很多細胞都飄起來了，第二天再來看（我需要給藥24h）細胞狀態(tài)也不是很好。 我就猜測我在換液這一步就對細胞造成了影響，看了一下其他的貼子，我就試了一下先只棄掉50微升的培養(yǎng)液，不吸干（原來是100微升種的板），然后再加入200微升的pbs清洗一次，再棄去200微升，再加200微升的pbs清洗，反復(fù)三到四次，這樣我洗完之后確實是細胞沒有飄起來。但是我最后又剩了50微的pbs在里面，我如果吸干再給藥也還是會飄起來。 所以我現(xiàn)在就只想到把pbs直接換成空白培養(yǎng)基來洗，這樣最后剩下的50微就是空白培養(yǎng)基，然后我再把我的藥物配成成50微的雙倍濃度加進去。 可是這樣又面臨一些問題： 1.我反復(fù)洗這么多次，最后孔里剩下的溶液肯定和50微是有誤差的， 2.我50微藥物加到具有50微培養(yǎng)基的孔里，藥物最后是否可以均勻分布，但是我又不敢在孔里混勻 3.這樣洗對溶液的消耗實在是太大了  請問大家對這些問題有什么建議嗎 感激不盡 |
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