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天兆9611鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
有關(guān)IPTG誘導(dǎo)的相關(guān)問題 已有1人參與
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有關(guān)于誘導(dǎo)的問題一直有問題不明白想請(qǐng)教各位。 1.誘導(dǎo)前先將菌液培養(yǎng)至OD大約0.5左右后能否先放入4°里存放,待到需要誘導(dǎo)時(shí)取出加入IPTG再做誘導(dǎo)可以嗎? 2.誘導(dǎo)完成后可以先將菌體離心后收集菌體,放入4°中暫存,過段時(shí)間后再加入緩沖液再破碎可以嗎? 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |

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為什么不趁著新鮮的時(shí)候誘導(dǎo)和離心破碎呢? 關(guān)于第一個(gè)問題:菌誘導(dǎo)后到達(dá)0.5,正處于對(duì)數(shù)期是比較有活力的,放在4°C后因?yàn)榈蜏貢?huì)導(dǎo)致菌活下降,那么可能就會(huì)影響誘導(dǎo)結(jié)果。 第二個(gè)問題:誘導(dǎo)之后離心加緩沖液破碎放在4°C會(huì)比較好,如果直接離心菌體,菌自身蛋白酶可能會(huì)你的目的蛋白降解。 |
鐵蟲 (小有名氣)

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