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許阿君新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
畢赤酵母GS115表達(dá)
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各位蟲(chóng)友們好，我是做畢赤酵母轉(zhuǎn)化的，載體為pPICZαA，現(xiàn)在遇到了表達(dá)的抗菌肽無(wú)活性的問(wèn)題。操作: 挑多個(gè)單菌落于25mlBMGY(250ml錐形瓶)培養(yǎng)基中，養(yǎng)一天半左右，換成200ml的BMMY培養(yǎng)基（500ml錐形瓶），每天加甲醇誘導(dǎo)，但是沒(méi)有活性(上半年養(yǎng)的最后一批上清也沒(méi)有抑菌圈，但是過(guò)了一個(gè)寒假，放在四度里，又有活性了) 此外，在BMGY培養(yǎng)基里養(yǎng)的時(shí)候，濃度也上不去，到達(dá)不了文獻(xiàn)里說(shuō)的那么高（要求OD600達(dá)到8.0） 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
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ericdoner
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2樓2022-04-09 08:07:05
ericdoner
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而且建議等體積更換，即多少BMGY就換到多少BMMY中，不要做稀釋?zhuān)瑫r(shí)培養(yǎng)基體積不應(yīng)該超過(guò)瓶體積的1/3。 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶(hù)端 |
3樓2022-04-09 08:08:53
4樓2022-04-09 08:37:00
許阿君
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感謝蟲(chóng)友，現(xiàn)在已經(jīng)排除了BMGY濃度過(guò)低的問(wèn)題，正在做等體積交換培養(yǎng)基，看看是否會(huì)好 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
5樓2022-04-21 22:48:41
瀾滄的愛(ài)
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我覺(jué)得誘導(dǎo)表達(dá)完之后，跑蛋白電泳看下有沒(méi)有目的條帶。確定下是沒(méi)有表達(dá)還是表達(dá)了沒(méi)活性 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
6樓2022-04-22 07:09:38
許阿君
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7樓2022-04-23 16:43:44
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